乳糖酶制剂活力测定方法的研究

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1、食品科技食品安全与检测FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY2010年第35卷第4期乳糖酶制剂活力测定方法的研究*赵华梅，王曼霞，牟志春，蔡发(山东出入境检验检疫局技术中心，青岛266001)摘要：乳糖酶是一种重要的酶制剂，广泛地应用于食品特别是乳品工业。目前国内没有乳糖酶的活性测定方法标准。参照美国食品药品法典第五版(FCCⅤ)，对国内外测定条件进行了逐项试验的研究，建立了乳糖酶活力测定的方法。关键词：乳糖酶；酶活力；测定方法中图分类号：TS201.2文献标志码：A文章编号：1005-9989(2010)0

2、4-0240-03StudyonthedeterminationofenzymaticactiveforlactaseZHAOHua-mei,WANGMan-xia,MUZhi-chun,CAIFa*(TheTechnicalCenterofShandongEntry-exitInspectionandQuarantineBureau,Qingdao266001)Abstract:Lastaseisanimportntenzyme,whichusedinfoodstuffswidely,andthereisthewid

3、estapplicationinthedariyindustry.Chinahasnotstandardfordeterminationforenzymaticactivceoflactase.RefertodeterminationofenzymaticactiveforlactaseonFCCV,theanalyticalconditionswereselectedbytests.Keywords:lactase;enzymaticactive;determination乳糖酶(Lactase)按国际酶学委员会的命

4、名法，器官和皮肤组织中。现在商业上所有的β-半乳糖称为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-D-galactohy－苷酶都来源于微生物发酵法，基本上由酵母和drolase.E.C.3.2.1.23)，简称β-半乳糖苷酶(β-galactosi－Kluyveromyces.marxians霉菌发酵获得。我国目前dase)。乳糖酶可以水解乳糖生成葡萄糖和半乳糖乳糖酶的需求量以每年40%的增长率逐年增加，的混合物。其广泛应用于食品行业，特别是乳品在国内属新兴的高科技生物制品行业，国内大量工业，在牛乳中添加乳糖酶可以水解乳糖，解决

5、的乳糖酶的需求都基本来自于进口，价格昂贵。乳糖不耐症，增加牛奶营养的利用率；可以用于目前，国内还没有乳糖酶产品的检验标准方[1]生成具有特殊生理功能的低聚半乳糖；可用于水法，本文参考国际标准(FCCⅤ)的测定方法，对解乳清，解决乳清的排放；还可用于梨、苹果、国内外测定条件进行了逐项试验的研究，建立了土豆和中国水粟的软化和番茄、胡椒、甜瓜、樱乳糖酶活力测定的方法。桃核果和牛油果的成熟。我国于1999年将乳糖酶1试验部分作为新增补品种，列入食品添加剂行列。乳糖酶广泛地存在于扁桃、桃、杏、苹果和1.1仪器咖啡豆等植物中；大肠

6、杆菌、乳酸杆菌、酵母菌紫外分光光度计，电子天平，搅碎机，涡旋和霉菌等微生物中，以及有效哺乳动物的小肠等器，HH-4数显恒温水浴锅，pH仪。收稿日期：2009-06-04*通讯作者作者简介：赵华梅(1980—)，女，硕士研究生，主要从事食品添加剂的检验检疫工作。·240·食品科技2010年第35卷第4期FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY食品安全与检测1.2试剂与材料的吸光度为纵坐标做标准曲线，得出回归方程。乳糖酶制剂样品：哈尔滨美华公司。曲线必须是通过原点的一条直线，标准曲线斜率反应缓冲液：称取8.8g磷酸

7、二氢钾(KH2PO4)、即为每微摩尔邻硝基苯酚吸光度，也即消光系数(M)，8.0g三水磷酸氢二钾(K2HPO·43H2O)、0.25g七水硫其参考值为4.60±0.20。酸镁(MgSO4·7H2O)和18.6mg二水EDTA(C10H14N2按照下式计算酶制剂活性，以“XNL”表示，Na2O8·2H2O)溶解在900mL的水中，转入1000mL单位为酶活力单位每克(U/g)：的容量瓶，用水定容并摇匀，缓冲液的pH值应该C×8×fXNL=10×m×1.30在6.50±0.05之间。式中：C为测定液中邻硝基苯酚的浓度，ON

8、PG底物溶液：将250.0mg邻硝基苯-β-mmol/L，从标准曲线中得出；D-半乳糖苷(ο-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,8为反应液最终体积，mL；ONPG)溶解在约80mL反应缓冲液中，接着转移f为样品总的稀释因子；到100mL的容量瓶中，用反应缓冲液定容，摇m为样品质量，g；匀，最早在用