胎牛血清解冻和灭活

《胎牛血清解冻和灭活》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、解决血清使用中的常见问题 1、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。2、血清中包含絮状沉淀

2、，它们是什么，怎么处理？沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。3、实验室如何选择适合的血清？国内一致认为HYCLONE的血清是最好的，但是根据我在北美的经历，国外一般认为GIBCO比HYCLONE好，所以并不是价

3、格决定质量，但是总的来说这两种价格普遍偏贵，一般不是太娇气的细胞，国产的就够用了。此外，由于国内HYCLONE，GIBCO并没有生产线，我们只能从代理商那里买，而代理商又鱼龙混杂，所以买到假货的可能性也很大。所以，我一般会从直销员那里买血清，有的国外生物公司由于刚刚进入中国，知名度不高，但是其实在国外已经做得很不错了，如Wisent等，他们在国内有办事处，我会从那里拿，血清的品质和HYCLONE不相上下，但价格相对优惠很多。4、如何避免血清中产生沉淀？按如下操作可避免沉淀的产生：（1）解冻血清时，请随时将

4、之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。（2）血清分装冻存时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。（3）勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。（4）勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。（5）血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。（6）若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成

5、沉淀物的增多。5、培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。6、为什么要热灭活血清?加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。7、有必要做热灭活吗?实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进

6、，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!8、细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状

7、态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：（1）细胞生长过老，破碎的细胞残骸；（2）血清质量不好，反复冻融的结果；（3）配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；（4）配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；（5）培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。9、细胞培养中如何防止黑点生

8、成？（1）尽可能地减少血清冻融次数。（2）培养基无需37℃水浴。（3）培养基保持最佳PH值7.0-7.2。（4）严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。（5）掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。1、化冻将血清从-20度冰箱中取出，室温（或浸于自来水中）化冻（约需要30分钟至2小时，也可放于4度冰箱化冻过夜；化冻后若不马上灭活，可以放入4度冰箱中暂时保存）2、灭活（1）放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个空的血清瓶，内