动物血清病毒灭活研究进展

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1、甘肃农业2011年第054期（总298期）理论探讨动物血清病毒灭活研究进展石真真，李倬（酋北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州730030）摘要：本文主要介绍了加热法、有机溶剂/表面活性剂（S/D法、）甲醛灭活法、亚甲蓝光化学（M法、丙内酯法等五B）卩种动物血清病毒灭活技术及目前国内外最新研究进展，旨在进可靠、省时，效果乂好，乂可应用到具一步寻找出一种更为安全、体生产过程屮去的新型灭活方法，从而为动物血清屮各种病毒的灭活开辟一条全新的途径。二、动物血清制品屮病毒的灭活技术近年来发展起来的血液成分病毒灭活技术，在提高血液制品安全性方面具有一定潜力。在动物血

2、清病毒灭活过程中，不仅耍保证灭活的高效率，还不能影响其理化、生物学和免疫学性质，而且病毒灭活剂的残留应无毒副作用[3]。H前在动物血清制品病毒灭活技术应用和研究方法上国内外主要集中在以下方面。㈠加热当前国内外在灭活动物血清屮病毒时，采用的常规方法是热灭活法,如干热灭活法[4],巴氏加热法（60C,10小时。加热法相对比较简单，）并且可以在制品灌装到成品容器封口后再加热，防止制品加热灭活病毒后再次被病毒污染。因此，在病毒灭活研究和应用早期，加热法被广泛地应用于各种血液制品的病毒灭活研究中，早期获得药政当局批准文号的病毒灭活制品也均为热处理制品。第一，干热灭活

3、法。干热灭活法即冻干后的制剂经加热处10理、干热杀灭病毒的方法。常用的干热法有60C〜80°C.小时〜72小时加热法及80°C.小时处理法。许金波等用100°C72处理IgG30分钟,可灭活水疱性口炎病毒8.2Log[5]020世纪80年代初，用601〜80C、小时〜72小时加热处理FVHI冻10干浓制剂和凝血酶原复合物。但现己证明这种方法不能彻底灭活HEV、HCV、[6]。80°C、小时干热处理己被证明能有效灭HIV而72HCV、[7]。干热灭活法仅适用于冻干制剂的病毒灭活。HIV活HEV、第二，巴氏加热法。此方法的理论依据是通过对温度及作用吋间的选择，

4、使病焉结构的破坏速率远人于蛋白质结构的破坏速率。近50年的临床使用结果和近來的动物实验均证实，白蛋白在溶液状态下经60°C.小时加热处理后，不仅能灭活HBV,10也能灭活IICV和IIIV。因此，巴氏加热法较广泛地应用于白蛋白的灭活，使白蛋白成为在病毒安全上最可靠的一种血液制品。由于加热是通过热量传递使病毒蛋白变性破坏，从而杀死病毒，因此仍存在一定的缺点。周铁群等通过用巴氏加热法灭活水泡性口炎病毒（VSV[8],）证明经该法处理的样品，可能由于加热对样品屮某些成分，如蛋白的影响（导致蛋白变性沉淀，使得）原倍样品对检测系统细胞有不同程度的毒性，导致实验最终计

5、算的病毒灭活效果偏低。因此，对血清加热时，高温对血清蛋白分子，特别是热不稳定的凝血因子活性的损害较大。动物血清屮牛病毒性腹泻病毒（BVDV现大多采用此方法，）虽然BVDV病毒在56°C时可灭活，但也不能确保完全灭活血清中的BVDV病毒。并且此方法需要10小时，较为耗时，同时对凝血因了和其他有效关键词：动物血清；病毒；灭活动物血清作为医药生物技术产品中重要的原辅材料Z-,是细胞培养用培养基的主要成分。细胞培养在现代生物技术制药尤其在基因工程药物和疫苗研究生产过程中具有特殊的作用和价值，不但生物技术药物很多是通过细胞培养来实现的，而且细胞工程、杂交瘤单克隆抗体

6、、基因治疗、发酵工程和酶工程等同样也依赖于细胞培养的过程來实现。而在细胞培养的发展过程中，培养基的质量又是其中的关键，直接影响着生物技术药物的质量安全。随着现代生物技术制药的进步，细胞培养用动物血清的安全性愈來愈受到关注。目前美国等国家提出用“三重安全网"（triplesafetynet来保证动物血清等血液制品的安全。即：）加强血源管理；［1］增加必耍的检验项冃和提高耍求；改进丁艺，在制造过程屮引入其屮，对血液制品进行灭活病毒处理被去除或灭活病毒的步骤。认为是行Z有效的措施，也是保证血液制品安全非常重要的环节。一、动物血清的特性及主要病毒动物血清是一种很复

7、杂的混合物，具具有促细胞贴壁、分裂生长、抑制胰蛋白酶、解焉等功能，人类已知的主要成分有激素类蛋白、a2-巨球蛋白、转铁蛋白、成纤维促细胞生长因子、表皮细胞促细胞生长因子等多肽以及胰岛素、促生长激素等激素和与蛋白相结合状态的微量元素和氨基酸，对培养细胞的生长繁殖发挥着极其重要甚至是难以替代的作用［2］。冃前动物血清作为各种培养基屮的主要成分，其质量起着重要的作用。供组织培养、细胞培养和诊断试剂等用的动物血清主要是新生牛血清，此外，按不同研究及使用目的，还包括胎牛血清、小牛血清、成牛血清、马血清、羊血清、鸡血清、兔血清及小门鼠等实验动物血清。动物血清中含多种病

8、毒，如牛兰舌病毒、牛腺病毒、牛细小病毒、牛病毒性腹泄病毒、狂犬病病