仪器分析-陈凡

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1、仪器分析课程论文高效液相色谱法（HPLC）和毛细管电泳（CE）技术原理及在农药残留分析中的应用姓名：陈凡专业班级：环境工程2011-1学号：22201131991.高效液相色谱（HPLC）法高效液相色谱法是以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同，

2、它们之间的主要差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。1.1高效液相色谱法操作原理：1.1.1高效液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条

3、件下得以分离。1.1.2高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分Ｃ在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个

4、含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。高效液相色谱法是一种传统的检测方法。它可以分离检测极性强、分子量大的离子型农药,

5、尤其适用于对不易气化或受热易分解农药的检测。近年来,采用高效色谱柱、高压泵和高灵敏度的检测器、柱前或柱后衍生化技术以及计算机联用等,大大提高了液相色谱的检测效率、灵敏度、速度和操作自动化程度,现已成为农药残留检测不可缺少的重要方法。1.2高效液相色谱法在农药残留分析中的应用林兴发等[1]采用C18XDB柱，甲醇/水（80/20）为流动相，250nm为检测波长测定农药氟虫脲，相关系数R2=0.9999，最小检测限为1.4ng，相对标准偏差为0.19%，加标回收率在98.2%~100.2%范围内。2.毛细管

6、电泳（CE）技术毛细管电泳技术是在电泳技术的基础上发展的一种分离技术。与HPLC相比，CE有更高的分辨能力。其工作原理是使毛细管内的不同带电粒子（离子、分子或衍生物）在高压场作用下以不同的速度在背景缓冲液中定向迁移,从而进行分离。根据样品组分的背景缓冲液中所受作用的不同,CE又被分为毛细管区带电泳（CZE）、毛细管凝胶电泳（CGE）、毛细管等电聚焦电泳（IEF）、胶束电动力学毛细管色谱（MEKC）、毛细管等速电泳（ITP）等几大类。自80年代Jorgenson把CE应用于分析化学以来,这一技术已发展成为

7、分离科学中最活跃的领域之一。它具有灵敏度高、耗资少、样品消耗量很小（每次进样只是纳升级）、分离柱效高、使用方便等优点,非常适用于那些难以用传统的液相色谱法分离的离子化样品的分离与分析,其分离效率可达数百万理论塔板数。目前激光诱导荧光检测器已商品化，其检测灵敏度比原来的紫外检测器提高1000倍。2.1毛细管电泳分析技术原理2.1.1毛细管电泳分离原理（1）电泳迁移在高压电场下，带电离子向相反的方向移动。（2）电渗迁移当毛细管内充满缓冲溶液时，毛细管壁上的硅羟基发生解离，生成氢离子溶解在溶液中，这样就使毛细

8、管壁带上负电荷与溶液形成双电层，在毛细管的两端加上直流电场后，带正电的溶液就会整体的向负极端移动，这就形成了电渗流。CE在操作缓冲溶液中，带电粒子的运动速度等于电泳速度和电渗速度的矢量和，电渗速度一般大于电泳速度，因此即使是阴离子也会从阳极端流向阴极端。加大缓冲溶液的酸度、在缓冲溶液中加入有机试剂都会减少硅羟基的解离，减小电渗流。2.1.2毛细管电泳的分离模式（1）毛细管区带电泳将待分析溶液引入毛细管进样一端，施加直流电压后，各组分按各自的