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《G1期细胞周期相关蛋白对POLD1基因启动子活性的调控.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、+!&!第!"卷!第#期!$%%"年#月"学术论文"*!期细胞周期相关蛋白对!"#$%基因启动子活性的调控"徐!恒!!""%!"""%%!朱晓宇!张海江!石!磊李!莉%%%!""""!宋楠萌!桑建利!9./BQCc71P4QD16CH8IBB2BR@4V18174!K*("((%!cH*(%9北京师范大学生命科学学院教育部细胞增殖与调控重点实验室!北京!""#+$摘要!!7;<=>基因编码L]*聚合酶5的催化亚基9然而作为最重要的复制蛋白!目前并不清楚其表达的细胞周期调控机制9研究中运用细胞周期同步化及荧光素酶报告基因测定了7;<=>启动子在细胞周
2、期不同时相的活性!结果显示启动子活性随着细胞周期进程而变化!在早H期最高9为进一步确定调控7;<=>表达的细胞周期相关因子!应用不同质粒转染@,<+细胞!分别筛选得到稳定细胞系9荧光素酶实验表明增强3$(或3%!的表达!抑制,C8217.或,LJ%的表达都能抑制7;<=>启动子活性#而抑制,LJ)或,C8217L!的表达对启动子活性没有明显影响9瞬时共转染实验进一步验证,C8217.或,LJ%受到抑制后能够降低7;<=>启动子活性9研究初步探讨了7;<=>基因表达的细胞周期调控通路!进一步了解细胞周期因子对L]*复制体调控的复杂机制9关键词!!+(
3、,-!细胞周期调控!!"#$%基因表达!启动子*(+!!哺乳动物细胞L]*复制由众多蛋白质共同参胞周期调控中都起着重要作用9哺乳动物细胞与!前复制复合体及L]*复制复合体这两个重要3B25由)个亚基"3!%$!3&&!3$"及3!%$构成!其中的多蛋白系统在不同阶段发挥各自功能最终保证每3!%$亚基为催化亚基!具有$m’(mL]*聚合酶和个细胞周期中L]*只能精确复制一次9&前复制复*)!$+(m’$m核酸外切酶功能9在L]*复制过程中!合体’至少由=Y,!,V8&!,6V!及@8/构成9细3B25与细胞增殖核抗原"E,]*$及复制因子,胞周期通过
4、,C8217,,LJ复合体的调控作用赋予了"Y<,$构成的全酶在Y]*引物形成后结合复制叉!*!+该系统引发复制及抑制重复复制的功能9包含了并以其持续合成能力最终完成了前导链和后滞链的*&)#+最主要的L]*复制酶)L]*聚合酶5"3B25$的延伸9人类细胞中编码3!%$亚基的7;<=>基L]*复制复合体能够在复制叉形成后进行L]*合因于!MM!年被克隆!它定位于染色体!M‘!(9(’‘!(9)!*%+*$!M)!!+成!其活性也受到了,C8217,,LJ复合体的调控9包括%+个外显子和%&个内含子97;<=>基*!%+L]*聚合酶5在L]*复制%
5、修复%重组及细因启动子富含K,碱基!没有>*>*框9在?420!%""&’"(’(!收稿!%""&’!%’!)收修改稿!!"国家自然科学基金"批准号#("%+"&&($和美国天业科技有限公司"Y""!$资助项目!""第一作者和通信作者!.’/012#I47A&###!C0IBB98B/!"""共同第一作者""""共同通信作者!.’/012#D07Ae10721!%&(9746!第!"卷!第#期!$%%"年#月+!+细胞中!其核心启动子位于主要转录起始位点上游控作用9更有意思的是3$(及3%!的高表达也能够*!(+(%#个核苷酸的区域内9抑制7;<=
6、>启动子活性9这些结果初步揭示了L]*复制受到细胞周期的严格调控9在K!7;<=>基因表达的细胞周期调控通路!进而了解了期!众多蛋白质参与了L]*复制的调节!其中,C’K!期相关蛋白对L]*复制调控的复杂机制98217.,,LJ%和,C8217L!,,LJ)两个复合体可能!!材料与方法起到重要的作用9二者都能磷酸化下游的Y-蛋白家族!进而导致.%<家族转录因子的释放!引发一!"!!质粒构建*!))!#+系列基因表达9在细胞周期进程中!,C82173K;%’5"!+$#$由广西医科大学黎肇炎教授惠L!,,LJ)先于,C8217.,,LJ%发挥功能!它
7、对Y-赠9该质粒是将7;<=>基因$m上游约!9#F:区域家族磷酸化的结果之一是使,C8217.表达水平升高的L]*连接到含有荧光素酶报告基因的3K;%’并结合,LJ%进而导致更多复制相关基因的表:0D18"EQB/4A0$载体中构建而成!能够利用*!M+达9然而这两类复合体对Y-家族的磷酸化能够7;<=>启动子活性引发报告基因的表达93d^)!’引发不同基因的转录!二者的功能并非前后依赖的74B真核表达载体由新加坡国立大学王跃教授惠赠9关系*%"+a*
8、$(重组质粒其]端结构域能够与众多,C8217!,LJ结合而引起由中国科学院上海生命科学学院吴家睿研究员惠细胞周期阻滞(其
