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《可剪切多拷贝抗菌肽融合表达载体的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、HEREDITAS(Beijing)2007年6月,29(6):758―764ISSN0253-9772www.chinagene.cn技术与方法DOI:10.1360/yc-007-0758可剪切多拷贝抗菌肽融合表达载体的构建1，21121汪小福，刘仁虎，陈笑芸,高智谋,陈锦清1.浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所,杭州310021;2.安徽农业大学生命科学院,合肥230036摘要:抗菌肽是生物体防御系统产生的一类对外源病菌具有高效杀灭活性的小分子多肽,在植物抗病基因工程中具有重要的应用价值。Thanatin是刺肩蝽(Podisu
2、smaculiventris)成虫经诱导产生的一种抗菌肽,由21个氨基酸残基组成,该抗菌肽对革兰阳性、革兰阴性菌以及真菌都有很强的抗菌活性。为研究该抗菌肽转入油菜对菌核病抗性提高的效果,采用同尾酶反复酶切连接的方法构建了分别含1∼5拷贝的Thanatin串联融合表达载体,并导入农杆菌用于油菜的遗传转化。研究采用引物重叠法扩增并克隆了抗菌肽基因,并采用了一种在植物体内可被特异性切割的短肽作为连接肽,使多拷贝融合表达的抗菌肽在植物体内可自动剪切为有功能活性的单个抗菌肽单元,以增加抗菌肽表达丰度和抗菌肽的稳定性。研究还采用了大豆几丁质酶的信号
3、肽作为引导肽引导多拷贝融合表达的抗菌肽分泌到细胞间隙,以增强抗菌肽作用效果。关键词:抗菌肽;Thanatin;串联重复;融合表达;载体构建ConstructionofvectorsforexpressionofcleavabletandemrepeatThanatinfusionproteininplants1,21121WANGXiao-Fu,LIURen-Hu,CHENXiao-Yun,GAOZhi-Mou,CHENJin-Qing1.InstituteofVirologyandBiotechnology,ZhejiangAcade
4、myofAgriculturalSciences,Hangzhou310021,China;2.CollegeofLifeSciences,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230036,ChinaAbstract:Thanatin,a21-residueantimicrobialpeptide,isaninducibleinsectpeptidewithabroadrangeofactivityagainstbacteriaandfungi.Itcanimprovetheexpressionlevelo
5、ftheantimicrobialpeptideinplantstoexpressthepeptideastan-demrepeatfusionproteincontainingmultipleThanatincopies.However,thefusionproteinhasnoantimicrobialactivity.TomakethefusionproteinautomaticallybreakintosingleThanatinunitwithantimicrobialactivity,thefusedThanatinwass
6、pacedbyalinkerpeptide,whichwascleavableinvivo.Thesoybean(GlysinemaxL.)chitinasesignalpeptidewasfusedtotheNendofthefusionproteintoinducetheantimicrobialpeptideaccumulatedinintercellularspace.Toconstructthevec-torsforexpressionofthefusionprotein,theoverlappedprimerswereuse
7、dtoclonetheantimicrobialpeptidegeneandtheco-adhesiveendrestrictionandligationstrategywasusedtoaddtherepeatunitonebyone.Vectorscontaining1to5repeatunitsofThanatinwereconstructedrespectively.Thesevectorswerebeingusedtotransformplantstoimprovplantdiseaseresistance.Keywords:
8、antimicrobialpeptide;Thanatin;tandemrepeat;fusionprotein;vectorconstruciton抗菌肽是生物体防御系统中产生的一类对外源物来源的抗菌肽,
