发酵液中聚苹果酸的分离提取t

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1、分类号密级UDC编号学位论文发酵液中聚苹果酸的分离提取郑谊丰指导教师姓名周华（教授）申请学位级别理学硕士专业名称微生物学论文提交日期2010年6月2010年5月27日TheabstractionofpolymalicacidfromfermentationbrothDissertationSubmittedtoNanjingUniversityofTechnologyinpartialfulfillmentofrequirementforthedegreeofMasterofScienceinMicrob

2、iologyByYifengZhengSupervisor:Prof.HuaZhouJune.2010学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南京工业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：学位论文的使用声明□1、南京工业大学、国家图书馆、中国科

3、学技术信息研究所、万方数据电子出版社、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文并通过网络向社会提供信息服务。论文的公布（包括刊登）授权南京工业大学研究生部办理。（打钩生效）□2、本论文已经通过保密申请，请保留三年后按照第一项公开（打钩生效）□3、本论文已经通过校军工保密申请，不予公开（打钩生效）研究生签名：导师签名：日期：日期：硕士研究论文摘要水溶性脂肪族聚酯聚苹果酸(polymalicacid,PMLA)是一种新型生物高分子，

4、存在有α、β和γ三种构型，天然的PMLA只为β型。PMLA具备两个显著优点：⑴易代谢性，由于L-苹果酸是TCA循环的中间体，PMLA易于在生物体内通过代谢途径除去；⑵易修饰性，PMLA在侧链上具有悬挂羧基，容易与其它官能团反应而制得PMLA衍生物，或引入功能基团或小分子化合物。因其良好的水溶性、生物可降解性以及生物相容性，能够与充当生理溶剂的水紧密接触，成为理想的生物材料和药物载体，被广泛应用于医药领域、靶向给药体系、蛋白质药物给药系统以及抗癌药物给药系统。目前PMLA的生产方法主要有化学合成法和生物发酵

5、法，化学合成法存在合成工艺复杂、有机溶剂残留难以去除等不足，突显了生物发酵法生产PMLA的广阔发展前景。要实现PMLA的规模化应用，就必须对发酵液中的PMLA提取工艺进行研究。本文建立了定量检测发酵液中PMLA的方法，采用高效液相法在PrevailC18色谱柱(4.6mm×250mm,4μm)上定量测定发酵生产的聚苹果酸，流动相为乙腈和0.025M磷酸二氢钾混合溶液（pH2.5，V:V=5:95），流速为1.0mL/min，检测波长为210nm，柱温为25℃。发酵液经离心、水解处理后进样，4min可以将其

6、中的L-苹果酸完全分离定量。方法的回收率为98.84%~101.47%；RSD为1.35%~1.72%。结果表明,该法是测定发酵液中聚苹果酸的快速有效的定量分析方法。本文以出芽短梗霉菌AureobasidiumpullulansBS02发酵所得的聚苹果酸发酵液作为研究对象，比较了甲醇、乙醇、丙酮有机溶剂对PMLA的沉淀效果，确定了最佳沉淀剂为甲醇；对甲醇的沉淀条件进行优化，确定了第一步去除普鲁兰沉淀甲醇用量为发酵液体积的十分之一，甲醇的最佳沉淀倍数为4，最佳pH为5；通过对分离液样品的GPC测定和粗品的纯

7、度测定，纯度为41.79%，收率为36.22%，表明甲醇沉淀发酵液中PMLA是可行的。I摘要本文针对PMLA粗品采用离子交换方法进行纯化提取，比较了不同型号的阴离子树脂对聚苹果酸的静态吸附量，其中以D296树脂对聚苹果酸的吸附量最大。通过静态和动态方法，考察了不同操作条件对固定床分离工艺的影响。结果表明：发酵液经甲醇有机溶剂初步提取后，调pH至9.5，以1BV/h流速上柱吸附，上柱量为4BV；用0.5mol/LNaCl洗脱，速度为1BV/h。所得PMLA样品的纯度达到93.2%，提取收率为79.46%。P

8、MLA纯化液经HZ-016阳离子树脂离子交换柱脱盐、冷冻干燥后得到PMLA纯品，进行结构鉴定、分子量测定和降解性能的初步研究。聚苹果酸的分子量测定以葡聚糖作为分子量标准品，经过葡聚糖标准方程计算，聚苹果酸纯品13的分子量Mw为3717Da，由28个苹果酸单体构成的。利用C-NMR技术对纯化后样品进行结构表征，确定其为PMLA。化学位移σ=38.402(CH2)，66.711(CH)，174.387(estercarbonyl)