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《ALA-光动力疗法对尖锐湿疣皮损中凋亡相关因子表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、涵草堂去黑头收缩毛孔官网：http://www.heitou886.comALA-光动力疗法对尖锐湿疣皮损中凋亡相关因子表达的影响尖锐湿疣叉称尖锐湿疣、生殖器疣或性病疣,是由人乳头瘤病毒(HPⅤ),主要是HPⅤ6型和11型感染所引起的良性肛门生殖器疣;其发病率呈逐年上升趋势。本病主要是通过性接触传播,也可垂直传播、间接接触传播;儿童生殖器、肛门疣和喉乳头瘤病的发生与患生殖器疣母亲分娩时感染有关。ALA~光动力疗法(AL肛PDT)是20世纪90年代引进的一种新兴的诊断和治疗手段,ALA即5-氨基酮戊酸,是一种外源性的光敏剂,其在体内
2、可转变为强大的内源性光敏剂即原卟啉Ⅸ(PPⅨ),在适当波长光源的照射及分子氧的存在下,可产生活性氧物质(主要是单态氧),从而造成靶组织的损伤。ALA~PDT在治疗尖锐湿疣方面已经取得了很好的临床疗效,但是与其作用机制相关的研究甚少。为了探讨ALA-PDT治疗尖锐湿疣的可能机制,我们收集了5例在我院接支ALA-PDT治疗的尖锐湿疣患者,并对他们治疗前后皮损中Bax、Bcl-2,几FasmRNA的表达进行了观察。I材料和方法1,1研究材料以局部手术切除方式收集5例在我院皮肤科接受ALA-PDT治疗的尖锐湿疣患者治疗前后的皮损,取材前均
3、签署知情同意书。患者的皮损经肉眼和病理学检查确诊为尖锐湿疣。其中男性16例,女性19例,年龄20~56岁,平均(27±3,5)岁。男性患者的皮损主要位于阴茎冠状沟、阴茎根部、包皮、龟头及肛周等,女性患者的皮损主要在阴道壁、大阴唇、小阴唇及肛周等处。皮损数目为2~~30专业介绍中医知识：涵草堂雀斑官网http://www.queban886.com涵草堂去黑头收缩毛孔官网：http://www.heitou886.com个,平均6.5个。研究对象中⒛例为初发患者,12例为复发患者。治疗前的皮损取自未经任何处理的菜花样赘生物,并拍摄皮
4、损照片;患者1~2周后复诊时,参照治疗前照片,收集与治疗前取材相同部位的皮肤作为治疗后的皮损。收集的标本立即置于冻存管中,并于液氮中・暂时保存,随即转移至一⒛℃的低温冰箱中保存各用。1・2治疗方法取适量的无菌棉球,将新鲜配制的20%的ALA溶液均匀分布于其上,将其均匀平铺在尖锐湿疣皮损及其周边2cm的皮肤上,随后依顺序予以无菌薄膜手套、纱布封包;至少4个小时后,去除纱布、薄膜手套及含ALA溶液的无菌棉球,并根据病人的耐受情况予适当能量的光源照射,波长为(633±I0)nm,功率密度为75~90mw/cm2,照射时间为⒛~~30mi
5、n。1.3实日寸定量RT-PCR1.3.2cDNA的合成用逆转录试剂盒PrimeScriptRTreagentkit(TAKARA),严格按照说明书操作，反应体系总体积为10ul，反应条件为37℃15min,85℃5s。1.4实时定量PCRBax上游引物序列为5′-GGGAcGAAcTGGA~CAGTAAcA~3′,下游引物序列为`5′-CCGCCA~CAAAGATGGTcAc-3′;由上海英潍捷基贸易有限公司合成;Bcl-2上游引物序列为5′-GGAGAGT~GCTGAAGAC-3′,下游引物序列为5′-AC1Tc~CTCTGT
6、GATGTTGTA~3′;Fas_上游引物序列专业介绍中医知识：涵草堂雀斑官网http://www.queban886.com涵草堂去黑头收缩毛孔官网：http://www.heitou886.com为5′-TTCCCATccTcCTGAcCAc-3′,下游引物序列为5′C-TCGTAAAcCCGCTTcccTcA~3′。由大连宝生物工程有限公司合成。GAPDH作为内参照,其上游引物序列为5′-GCACcGTcAAGGcTGAGAAc-3′,下游引物序列为5′-TGGTGAAGAcGccAGTGGA~3′;由上海英潍捷基贸易有限公
7、司合成。荧光定量PCR:荧光定量PCR仪为StratagenneMx3005P。以SYBRgeen方法检测,用荧光定量PCR试剂盒押bvemixextap(TAKARA),严格按照说明书操作,反应体系总体积为20uL;反应条件为预变性95%℃~30s,PcR反应95℃5S,60℃34S,循环们个周期。每个样本的每个因子(Bax、Bdl-2、Fas和内参GAPDH)均做两个复孔。1.5统计学处理实验所得到的ct值,经转化为2-△△ct值后进行统计学处理。经ALA-PDT治疗前的皮损中Bax、Bcl-2、Fas）的平均均为1;经ALA
8、-PDT治疗后的皮损中Bax、Bcl-2、Fas的2-△△ct值的计算方法为先计算两个复孔的平均值;目的基因(Bax、Bcl-2、Fas)的平均值减去内参基因(GAPDH)的平均值即为△ct值,治疗后的△ct减去治疗前的△ct即为△△ct值。所有数
