新型体外诊断技术的建立及其应用

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1、厦门大学硕士学位论文新型体外诊断技术的建立及其应用姓名：许晔申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：李庆阁20090701摘要新型体外诊断技术的建立以及应用本论文主要围绕新型体外诊断技术的建立展开研究。整个研究工作大致可以分为两个部分。其中第一部分主要涉及新型的稀土络合物修饰的荧光二氧化硅纳米颗粒的合成以及其在免疫分析中的应用。第二部分主要介绍了基于aptameT的多重细胞富集和分选的微流控芯片技术平台的建立。第一章为绪论，主要是对本论文中开展的研究工作所涉及的领域进行综述性的介绍。包括：纳米颗粒在荧光免疫分析中的应用

2、；纳米颗粒在免疫层析中的应用；aptamcr及其在癌细胞生物学中的应用。第二章主要介绍了新型的Eu(III)-BHHCT稀土络合物修饰的荧光硅纳米颗粒的合成以及在时间分辨荧光免疫分析中的应用。在本章节中我们首次采用了多重修饰的策略将Eu(111)．BHHCT修饰在二氧化硅纳米颗粒的表面，合成了稳定性好、荧光强度高的荧光纳米颗粒。另外，我们以乙肝表面抗原的检测为模型，建立了高灵敏的时间分辨荧光免疫分析体系。第三章主要介绍了新型的Tb(m)．BPTA稀土络合物修饰的荧光二氧化硅纳米颗粒的合成以及在时间分辨荧光免疫分析中的应用．在本章节中

3、我们通过EDC将络合物Tb(m)．BPTA交联到二氧化硅纳米颗粒表面，首次合成了共价修饰的TbOlO荧光纳米颗粒。并且该纳米颗粒也具有稳定性好、荧光强度高的优点。我们还以乙肝c抗原检测为模型，建立了高灵敏的时间分辨荧光免疫分析体系。第四章主要介绍了基于二氧化硅荧光纳米颗粒的双重时间分辨荧光免疫分析体系的建立。我们用Eu(111)．BHHCT荧光纳米颗粒和Tb(111)．BPTA荧光纳米颗粒，分别以乙肝表面抗原和乙肝c抗原为检测对象，建立了高灵敏的的双重时间分辨荧光免疫分析体系。并且对双色检测中，两个标记物所发出的荧光间的相互干扰进行

4、了详细的研究，首次提出了对干扰的矫正方法，并建立模型对矫正方法进行了验证。第五章主要介绍了基于稀土荧光二氧化硅纳米颗粒的免疫层析平台的建立。在本章节中，我们选用了Eu(III)-BHHCT荧光纳米颗粒，以乙肝表面抗原为检测摘要对象，对免疫层析的实验原材料，标记方法以及实验条件的进行了优化，建立了高灵敏的免疫层析检测平台。其检测灵敏度比传统的胶体金免疫层析方法提高了10--一20倍。并且我们还建立了基于PhotoShop软件的检测结果定量分析方法。使我们的免疫层析检测具有定量分析的能力。第六章主要介绍了稀土荧光纳米颗粒免疫层析技术在鼠

5、伤寒沙门氏菌快速检测中的应用。进一步验证了稀土荧光纳米颗粒在免疫层析中应用的可行性。与商品化的胶体金试纸条进行对比，灵敏度提高了2～3个数量级。第七章主要介绍了基于aptamer的多重细胞富集和分选的微流控芯片技术平台的建立。在本章节中我们将aptamer技术与微流控芯片技术相结合，将针对不同癌细胞的aptamer固定于微流控芯片内通道的不同区域，实现了对混合细胞的分离、富集和分选。这个微流控芯片平台在一次实验中可以将稀有细胞富集135倍。并且分选出的细胞具有和正常培养的细胞相当的生长速率，而且细胞纯度也达到了96％。第八章总结了本

6、论文研究工作的创新性，并对该研究工作的进一步发展提出了设想。关键词：纳米颗粒、免疫分析、aptamer、微流控芯片2AbstractEstablishmentandApplicationofNovelIn-vitroDiagnosticsTechnologiesThisdissertationfocusesonestablishmentandapplicationofnovelin-vitrodiagnosticstechnologies．Itconsistsoftwoparts．Inthefirstpart,thesynthesi

7、sofnovellanthanidechelatescoatedsilicananoparticlesandtheirapplicationinimmunoassaiesa聆described．Inthesecondpart,allaptamerbasedmicrofluidicdeviceforenrichmentandsortingofmultiplecancercellsisintroduced．ChapterOBCisamicroreviewaboutourresearchworkrelatedarm．Itconsistso

8、fthreeparts，includingtheapplicationofnanoparticlesinthefluorescentimmunoassay；theapplicationofnanoparticlesinthelater