Taka逆转录试剂盒

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1、TaKaRaCode：D6110A®PrimeScript1stStrandcDNASynthesisKit（50次量）说明书宝生物工程(大连)有限公司目录内容页码●制品说明1●制品内容1●保存1●RNA样品制备1●RT-PCR及RealTimeRT-PCR反应相关试剂2●实验操作方法2●制品说明®+本制品是使用PrimeScriptRTase从TotalRNA或Poly(A)RNA合成1stStrandcDNA的试剂盒，含有1stStrandcDNA合成所需的全部试剂。®-PrimeScriptReverseTranscriptase是

2、TaKaRa公司独自开发的一种新型RNaseH型反转录酶。本酶具有极强的延伸能力，能够有效合成长达12kbp的1stStrandcDNA，即使对具有复杂二级结构的RNA，在42℃条件下也能得到良好的反转录效果，无需进行高温反转录反应（高温反转录反应会导致RNA的降解）。合成的1stStrandcDNA可广泛应用于2ndStrand合成、杂交、PCR扩增、RealTimePCR反应等。●制品内容（50次量）®1.PrimeScriptRTase（200U/μl）50μl®2.5×PrimeScriptBuffer200μl3.RNaseIn

3、hibitor（40U/μl）25μl4.dNTPMixture（10mMeach）50μl5.OligodTPrimer（50μM）50μl6.Random6mers（50μM）100μl7.RNasefreeH2O1ml【引物序列】引物名称引物序列Random6merspd(N)6OligodTPrimerTaKaRa独自开发的dT区域的序列**该序列和TaKaRaRNAPCRKit（AMV）Ver.3.0（TaKaRaCode:DRR019A）的OligodTAdaptorPrimer不同，不含有M13PrimerM4对应序列。【本

4、Kit以外需准备的主要试剂及仪器】1.PCR扩增仪。®TaKaRaPCRThermalCyclerDiceGradient（TaKaRaCode:TP600）等。2.电泳用凝胶。AgaroseRegular（TaKaRaCode:D601）等。3.微量离心机。4.微量移液器。●保存：-20℃。●RNA样品制备本试剂盒是将RNA合成cDNA的试剂盒。RNA的纯度会影响cDNA的合成量，而制备RNA的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用

5、实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。-1-【使用器具】尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。（1）用0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃下处理12小时。（2）然后在120℃下高压灭菌30分钟以除去残留的DEPC。RNA实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。【试剂配制】用于RNA实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60min）或用上述方法进行DEPC水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可使用RNA实验用的一次性塑料容器），使用的无菌水须用0

6、.1%的DEPC处理后进行高温高压灭菌。RNA实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。【制备方法】使用简单的RNA纯化方法即可获得满足于RT-PCR反应的RNA（只需少量的RNA便可进行RT-PCR反应）。但为了保证实验的成功率，建议使用GTC法（异硫氰酸胍法）制备的高纯度RNA。从培养细胞、组织中提取时，使用RNAisoPlus（TaKaRaCode:D9108）。®从血液中提取RNA时，建议使用Catrimox-14RNAIsolationKitVer.2.11（TaKaRaCode:DWA005），可在短时间内制备高纯度的

7、RNA。●RT-PCR及RealTimeRT-PCR反应相关试剂1stStrandcDNA合成反应液可以作为PCR、RealTimePCR反应用的模板。1stStrandcDNA合成反应液的添加量不要超过PCR反应体系的1/10（V/V）。1．PCR相关DNAPolymerase。®®高扩增效率：TaKaRaExTaq、TaKaRaExTaqHS®®长链DNA扩增：TaKaRaLATaq、TaKaRaLATaqHS®高保真PCR扩增：PrimeSTARHSDNAPolymerase2．RealTimePCR相关试剂。®TMSYBRGree

8、nI方法检测试剂：SYBRPremixExTaq（PerfectRealTime）®TMSYBRPremixExTaqII（PerfectRealTime）®TMSYBRPremixDimer