液相色谱仪的日常维护及性能验证

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1、液相色谱仪的日常维护及性能验证Open•前言•日常维护及注意事项•简单部件的替换•简单的性能验证Open前言QC的使命对样品出具真实而准确的检验数据。Open前言-如何获得准确的检验数据准确的数据培验验训证证过过过的的的人仪方员器法在GMP环境下的分析Open前言QC检验由下至上系统适应测试的工作----分析方法验证得到稳分析仪器验证定可靠的分析仪器的日常维护数据Open前言岛津公司ProminenceLC20A系列的日常维护及性能验证Open日常维护及注意事项色谱柱检测器进样器柱温箱输液泵溶剂废液

2、典型HPLC分析流程图Open日常维护及注意事项-流动相1.溶剂的注意事项-一定要使用HPLC级的有机溶剂HPLC级相对GR级的优势：•高纯度——HPLC分析中无干扰峰；•低含水量——避免了正相色谱柱的失活；•低UV背景吸收——避免了鬼峰及错误结论；•低挥发残留及固体颗粒——减少了仪器因色谱柱故障引起的停机时间。推荐霍尼韦尔HPLC级的理由：价格合理且交货期短，在我们实验室的使用，没有遇到问题。Open日常维护及注意事项-流动相2.水相的注意事项水质的要求-使用超纯水或重蒸水缓冲盐的选择-根据所配的

3、检测器选择合适的盐，缓冲盐的浓度不宜过高，要根据有机相的比例来决定，有机相的浓度大的话，可能会导致盐的析出。pH值的要求-合适的pH值能改善峰型，但是要考虑色谱柱的耐受范围。Open日常维护及注意事项-流动相3.脱气、过滤和保存的注意事项流动相配制完成后一定要脱气并用0.45um或更小孔径滤膜过滤。保存的要求-推荐使用棕色玻璃瓶（避免使用塑料容器）保存，可以避免藻类的生长。同时注意防灰尘和避免阳光直射。Open日常维护及注意事项-流动相4.流动相的有效期《药品GMP指南》-质量控制实验室与物料系统8

4、4页中的建议：缓冲液14天，使用前确认pH值，目视检查溶液应澄清HPLC流动相14天，使用前目视检查溶液应澄清。HPLC清洗溶液14天（纯化水），1个月（有机试剂或溶液）Open日常维护及注意事项-流动相5.流动相替换的注意事项不互溶的流动相不能直接更换缓冲盐不能直接用有机溶剂更换水缓冲盐异丙醇水正己烷有机溶剂Open日常维护及注意事项-输液泵泵的使用的几个注意事项如下：1.保证使用新的流动相前，新的流动相完全替换了旧的流动相（PURGE），并观察管路内是否有气泡存在；2.流速的增加最好不要一次增加

5、到位，对于较大的流速推荐分步增加，避免对色谱柱的伤害同时获得稳定的流速；3.注意避免使用纯乙腈作为流动相（岛津），避免单向阀内宝石球黏在球座上；4.注意清洗液（10％异丙醇）的日常替换，以保护柱塞杆和柱塞杆密封圈；（10％异丙醇有助于降低水的表面张力，并有抑菌作用）5.不要经常在泵能承受的压力上限附近使用泵，以延长泵的寿命。6.注意缓冲盐和水不能长期留在泵内，使用完后请及时替换。Open日常维护及注意事项-进样器手动进样器（Rheodyne7725i）：1.为了防止虹吸应注意使第五第六号放空管的出口

6、与进样口保持在同一平面.Open日常维护及注意事项-进样器2.为了更好的重现性，进样体积最好是定量环的5~6倍（全量注入），或者是一半（部分注入）。3.一定要使用合规格的平头针。一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈。同时，进样时，进样针应插到底，进样完成后拔出针，不使用时将针头留在进样器内。4.进完样后一定要及时冲洗进样器，特别是用盐或缓冲液作流动相由于这些溶液会形成结晶从而磨损垫圈。5.清洗时应使用专用进样口清洗针导管器联接，不要直接使用注射器。针管注意缓慢推进，小心反喷。进样口清洗器手柄组件O

7、pen日常维护及注意事项-进样器自动进样器1.注意使用合适的进样瓶塞，避免针头的磨损；2.进样器清洗液的及时更换和设定合理洗针参数，保证进样针无残留；3.注意进样托盘的保护；4.如有可能，进样瓶尽量一次使用，避免鬼峰的出现（尤其是在痕量分析和杂质分析时）。Open日常维护及注意事项-色谱柱良好色谱柱的使用1.购买新柱后一定要仔细阅读说明书，确认柱的使用条件以及清洗再生步骤，按照说明书条件测试色谱柱柱效，记录使用的初始压力；2.定期检测柱压和柱效（有条件的实施）；3.不同流动相之间转换时应注意溶剂的互

8、溶性；4.确认样品不会在流动相中析出或带有固体不溶物或者直接使用保护柱；5.样品进色谱柱之前最好过滤，如果样品量实在太少，可将离心后，取上清液装入进样瓶内，然后适当抬高进样针的位置，或者适当减少进样量。6.使用完后，及时用保存用溶剂替换掉流动相；7.高温环境下使用色谱柱后（如：40℃），在保持流速的情况下，等待温度降到室温后，放可卸下色谱柱；Open日常维护及注意事项-色谱柱8.长期不用时，清洗干净后，使用柱子说明书中指明的溶剂保存。柱子要从仪器上卸下并用堵头密封后保