酵母双杂交及其衍生系统

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1、生物技术通报·技术与方法·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2014年第1期酵母双杂交及其衍生系统12黄欣媛范红波（1.湖北工程学院特色果蔬质量安全控制湖北省重点实验室，孝感432000；2.湖北职业技术学院，孝感432000）摘要：酵母双杂交系统是一种研究蛋白质相互作用的分子生物学方法，过去20多年里，大量衍生系统的出现使得这套双杂交技术体系更加完善和高效，成为研究蛋白质-配体相互作用的重要技术手段，广泛应用于功能基因组学、蛋白质组学、病理学等研究领域。对酵母双杂交及其衍生系统的基本原理和应用进展进行综述。关键词：酵母双杂交系统蛋白

2、质相互作用双杂交技术体系TheYeastTwo-HybridSystemandItsSeveralDerivedSystems12HuangXinyuanFanHongbo（1.HubeiKeyLaboratoryofQualityControlofCharacteristicFruitsandVegetables，HubeiEngineeringUniversity，Xiaogan432000；2.HubeiPolytechnicInstitute，Xiaogan432000）Abstract: TheYeasttwo-hybrid（Y2H

3、）systemisamolecularbiologyapproachtodetectprotein-proteininteractions.Adiverseseriesoftechnologiesderivedfromithaveemergedinthepast20years,whichmakesthistwo-hybridmethodologysystemmorecompleteandefficient.Theyhavebeenamongthemostimportantandpowerfultoolstostudyptotein-ligan

4、dinteractionsthatwidelyusedinfunctionalgenomics,proteomicsandpathologystudy.ThisarticleprovidesanoverviewonthebasicprinciplesandapplicationprogressofY2Hsystemandsomederivedtechniques.Keywords: Yeasttwo-hybrid（Y2H）systemProtein-proteininteractionTwo-hybridmethodologysystem生物

5、大分子间的相互作用是有机体细胞活动的子区域从而激活基因的转录。两者分开时不能激活基础，在蛋白质层面上揭示生命活动本质是现代生基因转录，只有BD和AD通过一定方式在空间上足物学的一个主要目标。1989年诞生的酵母双杂交够靠近，才能发挥完整的GAL4转录因子活性。基［2］（Yeasttwo-hybrid，Y2H）系统以及随后出现的各种于此特点，Fields和Song设想以一对能相互作用衍生系统是研究蛋白质之间以及蛋白质和RNA、小的蛋白质为桥梁，将空间上分开的BD和AD彼此分子化合物之间相互作用的最重要的工具，已成功拉近，从而重建出具有活性的转录

6、因子，以此创立揭示了大量的蛋白相互作用，在细胞信号转导、蛋了Y2H系统。在该系统中，将BD和AD基因分别［1］白质组学、病理学、药物研发等方面有着广泛应用。和诱饵蛋白（Bait）和猎物蛋白（Prey）基因构建本文对Y2H系统的基本原理、衍生系统和应用进展成融合蛋白表达载体，使其在酵母中共表达出BD-等方面进行介绍。Bait和AD-Prey，借助Bait和Prey的物理性相互作1酵母双杂交系统的原理用使BD和AD相互靠近而产生具有功能的转录因子，进而激活1个或多个报告基因（如lacZ、HIS3酵母GAL4转录因子由两个可以分开的结构和URA3等

7、）的转录。域组成：DNA结合域（DNAbindingdomain，BD）负责结合基因的上游激活序列，将转录激活域2酵母双杂交系统的衍生系统（Transcriptionalactivationdomain，AD）募集到启动Y2H系统是在酵母菌这种真核细胞环境中研究收稿日期：2013-08-03基金项目：特色果蔬质量安全控制湖北省重点实验室开放基金项目（2013K04）作者简介：黄欣媛，女，博士，研究方向：生物化学与分子生物学；E-mail：huangxycn@gmail.com76生物技术通报BiotechnologyBulletin2014年

8、第1期蛋白相互作用的一种技术，具有操作简便、无需繁2.2报告基因的改进琐的蛋白纯化操作、可以检测较弱的相互作用等优多个报告基因的引入有利于提高Y2H技术的灵［3］［