透析液细菌内毒素检查

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1、细菌内毒素限量检查讲义——透析用水、透析液讲解董光宴1、试验条件必备2、标准要求3、供试品溶液的制备4、限量检查湛江博康海洋生物有限公司8/14/20211博康www.zj-hy.com一、试验条件必备1、经过培训合格的实验人员；2、实验室条件；3、必备的实验材料。8/14/20212博康www.zj-hy.com3必备的实验材料3.1必备材料①鲎试剂盒：具有国家批准文号，并依法检验合格。如：湛江博康海洋生物有限公司，卫药准字（88）SJ-04。8/14/20213博康www.zj-hy.com试剂名称用途1鲎试剂反应主剂鲎试剂与2内毒素工作品阳性对照3检查用水样本溶解鲎试剂与样本溶解

2、4酸性调节剂调节透析液的PH值【组成成份】每盒试剂组成每盒试剂配套试验耗材：无热原试管5ml×6支；无热原试管2ml×6支；无热原吸嘴0.25ml×15支。8/14/20214博康www.zj-hy.com②实验室要求洁净，无尘埃流通，室内温度要求20—25℃为宜。必要时应在超净工作台操作。8/14/20215博康www.zj-hy.com③恒温箱。④旋涡振荡器。⑤其它器具：消毒棉球，剪刀和封口膜等。8/14/20216博康www.zj-hy.com3.2取样取样器具必须符合2010年版《中国药品检验标准操作规范》310页——细菌内毒素检查法“3实验准备”规定：无外源性内毒素。必要时可

3、以用真空采血管（无添加剂）取样。8/14/20217博康www.zj-hy.com二、复用设备及用水要求《血液透析器复用操作规范》5.1.2水质要求：应定期检测复用用水细菌和内毒素的污染程度。应在血液透析器与复用系统连接处或尽可能接近此处进行水质检测。内毒素含量不得超过2EU/ml，干预限度为1EU/ml。当达到干预限度时，继续使用水处理系统是可以接受的，但应采取措施，防止系统污染进一步加重。8/14/20218博康www.zj-hy.com5复用设备及用水要求5.1.3水质细菌学、内毒素检测时间：最初应每周检测1次，连续2次检测结果符合要求后，细菌学检测应每月1次，内毒素检测应每3个

4、月至少1次。8/14/20219博康www.zj-hy.com三、供试品溶液的制备透析用水需进行稀释。一般要求供试品溶液的PH值在6.0～8.0的范围内。对于透析液，需调节PH值，可使用酸性调节剂调节PH值。8/14/202110博康www.zj-hy.com四限量检查透析用水、透析液已有内毒素检验标准，可直接进行内毒素检查。8/14/202111博康www.zj-hy.com1、试剂和样品鲎试剂盒（生产单位：湛江博康海洋生物有限公司，灵敏度：0.125EU/ml）细菌内毒素检查用水细菌内毒素工作标准品（10EU）透析用水8/14/202112博康www.zj-hy.com2、限值的确

5、定内毒素限值L=1.0EU/ml。8/14/202113博康www.zj-hy.com3、计算稀释倍数MVD=L/λ=1.0EU/ml/0.125EU/ml=8倍8/14/202114博康www.zj-hy.com4、操作方法编号名称A样品管B样品阳性对照C阳性对照D阴性对照8/14/202115博康www.zj-hy.com透析用水8倍稀释液0.2ml图示4.1供试品溶液的制备1.4ml8/14/202116博康www.zj-hy.com4.2阳性对照检验鲎试剂活性及试验有效性。4.3阴性对照检验试验操作及环境是否对试验有污染。0.25EU/ml8/14/202117博康www.zj

6、-hy.com补充：内毒素标准品的正确开启方法取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程应防止玻璃屑落入瓶内。正确（易折点）错误8/14/202118博康www.zj-hy.com注意：1、只能在安瓿的易折点上部开启内毒素，不能沿易折点开启，防止振荡过程中内毒素粘在封口膜上。2、只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶细菌内毒素工作标准品。8/14/202119博康www.zj-hy.com0.25EU/ml0.2ml0.2ml1.8ml0.6ml图示1EU/ml10EU/ml8/14/202120博康www.z

7、j-hy.com4.4供试品阳性对照目的是为了验证透析用水中有内毒素可以被检测出来。0.25EU/ml/8倍8/14/202121博康www.zj-hy.com5鲎试剂的准备取规格为0.1ml/支的鲎试剂8支，放在试管架上，排成4列，每列2支。轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解。8/14/202122博康www.zj-hy.com6加样其中2