现代分离技术-天然活性成分的层析纯化策略

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1、天然活性成分的层析纯化策略1层析方法：正相硅胶优点：经济、可常压操作、加压可提高效率局限性：不可逆吸附、使用大量有害有机溶剂、国产硅胶验证文件不健全2层析方法：反相硅胶优点：常用于检测、少量制备，有硅胶基架的C4，C8，C18以及聚苯乙烯基架的SOURCE介质多种选择，分辨率高。局限性：成本高，介质昂贵、放大生产困难3层析方法：大孔树脂优点：常用于组分粗提、流速快、经济、吸附少局限性：选择性少，验证文件不健全。合成原料及溶剂残留问题；缺乏公认统一的药用标准、条件的规范化、重现性4层析方法：聚酰胺优点：多用于

2、提纯黄酮、内酯类成分局限性：流速慢，验证文件不健全5层析方法：超临界萃取优点：快速、回收率高、CO2成本低、无需处理有机溶剂局限性：设备成本高，强极性物质提取受限制6层析方法：葡聚糖凝胶优点：适合含羟基、氨基、羧基、芳香环的苷类、黄酮、多酚、丹宁等。可多次使用局限性：流速慢，比硅胶更适合亲水性物质，可与硅胶为互补技术。7层析方法：离子交换优点：适合生物碱、有机酸等的分离。有些阴离子交换介质也适合苷类、皂苷、黄酮纯化，可多次使用局限性：受制于带电荷物质8纯化平台：生物碱平台技术：〈PH3的酸水提取—阳离子交换

3、SPSepharoseHP—中、高压硅胶反相生物碱带碱性，在传统的硅胶或氧化铝层析上效果往往不理想。SPSepharoseHP载量高、易于直接放大，对生物碱有特殊的选择性，可从酸水粗提物中分离结构近似的十几种生物碱，一步纯化可达60-80%的纯度。9纯化平台：生物碱中、高压反相层析如Source15RPC或C18硅胶可将纯度提高到90%以上。Source是以聚苯乙烯为基架的反相介质，可耐受1M强酸强碱，比传统的如反相介质使用范围更宽广，寿命更长。10纯化平台：有机酸平台技术：〉PH11的碱水提取—阴离子交换

4、QSepharoseHP或SephadexLH20—中、高压硅胶反相有机酸多成盐，亲水性强。带负电荷，经QSepharoseHP一步纯化可达50%纯度，然后再上SephadexLH20可至90%以上。11纯化平台：皂苷类平台技术：〉PH11的碱水提取—阴离子交换QSepharoseHP—中、高压硅胶反相皂苷同时具有强极性的糖基和弱极性的母核。皂苷含羧基12纯化平台：黄酮苷类平台技术：水和醇提取—阴离子交换QSepharoseFF去色素—SephadexLH20—中、高压硅胶反相QSepharoseFF是去处

5、植物色素的有效方法，可对提取物进行第一步纯化，SephadexLH20适合精细纯化13纯化平台：黄酮、醌、多酚类平台技术：水和醇提取—SephadexLH20—中、高压硅胶反相SephadexLH2014纯化平台：内酯、萜类平台技术：水和醇提取—中、高压硅胶反相管道化的加压硅胶层析可在密闭的环境下操作，大大提高生产速度、重复性、安全性、可控性。15纯化平台：蛋白质、活性肽、动物毒素平台技术：Sepharose离子交换；Superdex/Sephacryl分子筛层析—SourceＲＰＣ反相层析蛋白类物质在纯化

6、时需留意保持其空间结构，避免失活，所以一般采取温和的离子交换和分子筛层析，寡肽分子则可使用反相层析16纯化平台：多糖平台技术：水、醇提取—穿透式Sepharose离子交换脱蛋白—Superdex200/Sephacryl300-1000分子筛层析一种药材里可以含有多种类型的多糖，其结构、性质、功效不一。如香菇中含有水溶性、酸溶性、碱溶性多糖，综合利用分子筛及离子交换层析可进一步获得各组分纯品。多糖中的蛋白质可引起临床副反应，穿透式阴阳离子交换法可以一、两步快速去除多糖中残存的蛋白质，易于放大和自动化17