探究丹参对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注肾损伤的影响

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1、探究丹参对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注肾损伤的影响摘要：目的：初步探究丹参处理对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注所引起的肾损伤的作用。方法：选用健康家兔24只，随机分为3组：肠系膜上动脉缺血前注射生理盐水的对照组（Ａ组）、缺血前注射丹参注射液的实验组（B组）、再灌注前注射丹参注射液的实验组（C组）。常规动物实验操作找到肠系膜上动脉，夹闭家兔肠系膜上动脉30min造成缺血，再灌注30min。观察尿量，收集不同时期尿肌酐、血肌酐、丙二醛（MDA）并测定其含量。结果：家兔肠系膜上动脉缺血再灌注后尿量减少，A组减少最显著，其次

2、是B组，C组减少较轻。缺血再灌注后血肌酐、血清中丙二醛浓度增加，尿肌酐浓度下降，其中A组变化最明显，其次是Ｂ组，C组变化不明显。结论：丹参能减轻家兔肠系膜上动脉缺血再灌注所引起的肾损伤，对肾损伤有保护作用。关键词：肠系膜上动脉缺血再灌注丹参肾损伤肠缺血再灌注（ＩＩＲ）损伤是休克、严重创伤及复苏过程中常见的病理生理过程，普遍存在肠根阻、肠扭转、大手术、烧伤等。研究表明，小肠缺血再灌注后除对小肠组织本身造成损害外，还会通过全是炎症反应对其他器官造成损伤。目前认为，缺血再灌注损伤产生的主要机制与活性氧的损伤作用、钙超

3、载的作用、白细胞损伤作用、补体级联的损伤作用有关。研究表明，丹参具有扩张外周血管、抗血栓形成、改善微循环等作用。本实验采用家兔肠系膜上动脉缺血再灌注模型造成肠缺血，探讨丹参对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注所致的肾损伤的保护作用和影响及其可能的机制。1.材料与方法1.1材料：1.1.1实验动物：健康家兔２４只，体重２—３㎏，清洁级，由南方医科大学实验动物中心提供。1.1.2主要仪器：医用计算机记录系统（PcLab）及计算机、家兔手术台、哺乳动物手术器械一套、动脉插管、静脉插管、输尿管插管、压力换能器、离心机、分光光度

4、计，恒温水浴箱、带刻度的试管及试管夹、试管和试管架、EP管、微量加样枪带枪头、电子天平、黑色丝线、纱布等。1.1.3药品与试剂：丹参注射液（正大青春宝药业有限公司，国药准字Z33020117，浓度1.5g/ml）、20%乌拉坦、0.2%肝素、37℃的生理盐水、肌酐测定试剂（含试剂一、试剂二、试剂三、试剂四）、ＭＤＡ试剂盒、无水乙醇等。1.2方法：1.２.１动物选择与分组家兔２４只，体重２－３㎏。随机分成3大组,肠系膜上动脉缺血前注射生理盐水的对照组（A组）、缺血前注射丹参注射液的实验组（B组）、再灌注前注射丹参

5、的实验组（C组）。1.2.2动物手术家兔称重，用20%乌拉坦5ml/㎏耳缘静脉麻醉，麻醉后将家兔仰卧位固定在兔台上。家兔颈部备皮，沿甲状软骨下正中线剪开皮肤约6cm，分离右侧颈总静脉并从右侧颈总静脉插入静脉导管。分离左侧颈总动脉并左侧颈总动脉插管，手术完毕后，用生理盐水纱布覆盖创口。家兔耻骨联合上缘上0.5cm处备皮后沿前正中线剪开皮肤4～6cm，找到左侧输尿管并进行输尿管插管，手术完毕后，用生理盐水纱布覆盖腹部创口。家兔剑突下腹正中处备皮后沿正中线剪开皮肤4～6㎝，分离周围组织，找到肠系膜上动脉。输尿管插管完

6、成后，用有刻度的试管收集尿液10min，同时从颈动脉插管处抽取2ml血液。收集好的尿液和血液留待测定其中肌酐含量和血中的丙二醛（MDA）。1.2.3肠系膜上动脉缺血再灌注实验找到肠系膜上动脉后A、B、C三大组实验均注射30ml37℃生理盐水，然后用动脉夹夹闭肠系膜上动脉，同时A组实验注射10ml0.9%生理盐，B组实验注射丹参注射液2ml和8ml0.9%生理盐水。夹闭30min后分别从动脉采血2ml，收集尿液10min。同时松开动脉夹并对C组实验注射丹参注射液2ml和8ml0.9%生理盐水。再灌注30min后分

7、别从动脉采血2ml，收集尿液10min。收集好的尿液和血液留待测定其中肌酐含量和血中的丙二醛（MDA）。1.2.4血和尿肌酐的测定方法1.2.4.1取样：将全血标本置于3500转/分的离心机中离心10in，然后取血清（血浆）0.2ml放入玻璃试管，加入试剂二（钨酸蛋白沉淀剂）2ml，充分混匀，3500转/分，离心10分钟，取上清液按表1进行加样测定。取10μl尿液标本放入玻璃试管中，加入2ml蒸馏水按1：200比例稀释，按表1进行加样测定。1.2.4.2加样：表1肌酐测定加样量表加样（ml）标准管测定管空白管血

8、清（浆）蛋白滤液或稀释尿液（ml)01.60试剂一(50umol/L肌酐标准品)(ml)1.600双蒸水001.6试剂三（苦味酸溶液）（ml)0.50.50.5试剂四（0.7mol/L氢氧化钠溶液）（ml)0.50.50.51.2.4.3测定：充分混匀，37℃水浴10min，取出后冷却，以双蒸水调零，测波长510nm处各管吸光度OD值。1.2.4.4计算公式血清（浆）肌酐(μmol/L