碳样小单孢菌FIM99-663产生的新抑锈病素

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1、碳样小单孢菌FIM99-663产生的新抑锈病素作者：连云阳,谢阳,魏天恩,程振泰,程元荣单位：福建省微生物研究所福建省新药(微生物)筛选重点实验室，福州350007【摘要】在筛选新抗真菌抗生素过程中，从福建邵武森林土壤样品中分离得到一株对酵母样真菌有较强抗菌作用的小单孢菌FIM99-663。经分类鉴定为碳样小单孢菌MicromonosporacarbonaceaFIM99-663。该菌株发酵次级代谢产物含三个抗真菌活性组份，主成份为Fw99-663C组份，经提取、纯化，理化性质、光谱学分析发现它与新抑锈病素(neorustm

2、icin)同质。【关键词】小单孢菌；新抑锈病素；抗真菌抗生素NeorustmicinproducedbyM.carbonaceaFIM99-663LianYun-yang,XieYang,WeiTian-en,ChengZhen-taiandChengYuan-rong(FujianKeyLaboratoryofScreeningforNovelMicrobialProducts,FujianInstituteofMicrobiology,Fuzhou350007)ABSTRACTInthecourseofscreening

3、fornewantifungalantibiotics,Micromonosporasp.FIM99-663wasisolatedfromaforestsoilsamplecollectedinShaowu,China.Basedonthetaxonomicdata,thestrainwasidentifiedasMicromonosporacarbonaceaFIM99-663.TheculturebrothofFIM99-663containedA,BandCthreebioactivecomponents,andcom

4、ponentAandBweretracedandmajorcomponentCwasextractedandpurified.Thephysico-chemicalpropertiesandspectraofcomponentCshoweditwasidenticalwithantifungalantibioticneorustmicin.KEYWORDSMicromonospora;Neorustmicin;Antifungalantibiotic随着抗生素、激素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂等的广泛应用和器官移植等大型手术的实

5、施，近年来临床上深部真菌感染的发病率及其死亡率明显增加。但是，目前疗效确切可应用于临床治疗深部真菌感染的抗真菌药物只有两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑等屈指可数的几种药物。氟康唑等唑类药物的长期、大量使用，真菌耐药程度日益增加，两性霉素B等多烯类抗生素严重的毒副作用使临床应用受限。因此寻找新型、高效、低毒的抗深部真菌感染的药物一直是新药研究的重点之一［1］。我们在筛选新抗真菌抗生素过程中从小单孢菌中筛选到一株对隐球菌和白念珠菌有抗菌作用的菌种，编号为FIM99-663。本文报道该微生物菌种分类、发酵及其活性产物的提取纯化和鉴别。

6、1材料与方法1.1菌种与发酵菌株菌株FIM99-663从福建邵武森林土壤样品中分离，其发酵代谢产物具有抗真菌活性。分类菌株FIM99-663的孢子悬液在高氏-天冬素琼脂平板上划线，同时斜插无菌盖玻片，35℃培养，分别于5、10、20d取出盖玻片用光学显微镜及电镜观察菌丝及孢子的表面特征。培养特征和生理生化特性采用国际链霉菌规划(ISP)推荐的培养基和小单孢菌菌种描述的培养基35℃培养［2］，不同时间观察并记录结果。碳源利用试验以不加淀粉的高氏一号琼脂为基础培养基，分别加入各种碳源1.85%，35℃培养，观察30d。磷酸类脂、

7、枝菌酸和甲基萘醌的测定分别参照阎逊初［3］和阮继生等［4］的方法进行；DNA的G+Cmol%测定参照DeLey等的Tm值方法［5］。用溶菌酶法［6］提取总DNA模板，采用通用引物进行16SrDNA的PCR扩增，PCR产物经纯化后直接用TaqDyeDeoxyTerminatorCycleSequencingKit测序。发酵从菌株FIM99-663的沙土保存管中取少量沙土，接种于高氏琼脂斜面上，35℃培养12～15d。成熟的培养物用20%的甘油制成孢子悬液，分装后置-20℃备用。0.5ml的孢子悬液接入30ml种子培养基(%)：

8、可溶性淀粉1.5，葡萄糖0.5，蛋白胨0.5，酵母粉0.5，K2HPO4•3H2O0.05，MgSO4•7H2O0.05，NaCl0.05，(NH4)2SO40.05，CaCO30.1，消前pH7.5；32℃200r/min振荡培养40h，以5%接种量转入发酵培养基(%