海洋小单孢菌来源的轻快菌素b fw5233的体

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1、海洋小单孢菌来源的轻快菌素BFW5233的体【摘要】目的考察轻快菌素BFTT比色分析法、流式细胞法和高内涵药物筛选的方法检测FethodsTheinhibitoryeffectsoftheFTTassay,floetryandhighcontentscreeningmethods.ResultsFarineMicromonospora微生物次级代谢产物是新药的重要。海洋微生物具有独特的代谢方式，产生的次级代谢物化学结构具有明显的复杂性和多样性，有的是陆地微生物所不具备的。海洋微生物药物的研究开发工作始于20世纪7

2、0年代，在90年代得到很大的发展。迄今已从海洋微生物的代谢产物中分离出几百种生物活性物质，其中有些是可能有临床应用价值的抗肿瘤抗生素，如海洋放线菌产生的新型抗肿瘤抗生素lomaiviticins［1］和salinosporamideA［2］已进入临床研究阶段。因此从海洋微生物中筛选到新型抗肿瘤抗生素的成功率相对较大。从海洋小单孢菌筛选新抗肿瘤生物活性物质过程中，我们发现了海洋小单孢菌Micromonosporasp.FIM02523产生有抗肿瘤活性的脂肽类化合物FTT比色分析法测定各孔在570nm的光吸收值A57

3、0，计算不同浓度的Fl，加入Fl，36h时终止培养。分别收集细胞，PBS洗两次(1000r/min，5min)，细胞重悬于1ml冷75%乙醇中固定过夜，加等量的PBS洗两次(1000r/min，5min)，加胰RNA酶(10mg/ml，Sigma产品)100μl，置37℃15min。加碘化丙啶(PI)溶液(PI50μg/ml，柠檬酸钠0.1%，TritonX1000.1%)500μl，4℃30min，用流式细胞仪(BeckmanCoulterEpicsXLCytometer)检测并分析结果。(3)对小鼠成纤维细胞

4、L929细胞凋亡的影响L929细胞以3000个/孔的密度接种到胶原蛋白包被的96孔板上，37℃，5%CO2培养箱培养24h，加入不同浓度的Fics公司多指标细胞凋亡试剂盒进行测定，按试剂盒操作程序分别加入线粒体、细胞核荧光染色剂和细胞骨架纤维状肌动蛋白Factin的荧光染色剂，使用该公司的高内涵药物筛选系统(ArrayScanHCS)采集数据并进行分析［4］。2结果2.1对肿瘤细胞凋亡及细胞周期的影响Fl)。K562肿瘤细胞培养液加入Fl，培养36h时用流式细胞仪分析细胞凋亡和细胞周期。药物处理组可见明显的凋亡峰

5、，随药物浓度增大，凋亡细胞的比例增加。药物处理后的K562肿瘤细胞阻滞在G0/G1期，S期细胞比率下降(Tab.1)。G0/G1期的阻滞使细胞进入S期减少，抑制肿瘤细胞的增殖。2.2对肿瘤细胞核、骨架蛋白、线粒体膜电位的影响应用Cellomics公司多指标细胞凋亡试剂盒测定，并以紫衫醇为对照药物，应用该公司的ArrayScanHCS系统采集数据。Fl(紫衫醇IC50500ng/ml)，表明FW5233(rakicidinB)对肿瘤细胞生长的抑制作用浓度与对照药物紫杉醇相当。超过1μg/ml的Ficromonosp

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7、合物FAPkinasemediatedapoptosisandnecrosisinneonatalratcardiomyocytessubjectedtosimulatedischemiaandreoxygenation［J］.AmJPhysiolHeartCircPhysiol,2005,289(6):H2310～H2318.［8］RaoJY,LiN.Microfilamentactinremodelingasapotentialtargetforcancerdrugdevelopment［J］.CurrCan

8、cerDrugTarg,2004,4(4):345～354.［9］RenataV,KarelZ,SarkaJ,etal.SpecificcytoskeletonchangesduringapoptosisacpanyinginduceddifferentiationofHL60myeloidleukemiacells［J］.OncolRep,2003,14