雷公藤内酯醇干预血管成形术后再狭窄的研究

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1、上海第二医科大学博士学位论文雷公藤内酯醇干预血管成形术后再狭窄的研究姓名：陶蓉申请学位级别：博士专业：内科心血管指导教师：于金德20050401学位论文独创性声明y759917本人所星交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取褥的研究成聚。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。作者签名；堕墨日期：学位论文使用授权声明mlj4一／l本人完全了解一巳海第二医科大学有关保留、使用学位论

2、文的规定，学校有权保窝学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制弗允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名。P；雪露日期：2粤是蔓，盟．导师签名：．丑也删，3上海第二医科大学博士学位论文雷公藤内酯醇干预血管成形术后再狭窄的研究中文摘要【背景与目的】1977年，Gruentzig在临床上首次开展了经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)

3、。目前，经皮冠状动脉介入治疗已经成为冠心痛治疗的主要手段，80％以上的首次病变接受冠状动脉内支架术治疗。但是冠状动脉支架术后再狭窄成为影响介入治疗长期疗效的重耍原因，再狭窄可发生在冠状动脉介入治疗术后数周至数月，普通裸支架再狭窄率可高达20％．40％。目前认为再狭窄的形成主要包括三个相对独立又互相联系的环节：血栓形成：内膜增生；血管重塑。为了克服这一难题，学者们进行了各种尝试和研究，药物涂层支架应运而生，它被认为是介入心脏病发展史上的又一个里程碑。作为再狭窄发生的主要因素，血管平滑肌细胞增殖是预防和治疗

4、再狭窄的最佳目标。其中雷帕霉素涂层支架是以血管平滑肌细胞为靶点控制过度增殖的成功范例。人们期待有更多种类的药物洗脱支架问世和在临床上应用，但涂层药物的种类、剂量的选择，以及药物涂层支架引起的副作用正有待全面的评价。本研究中，我们选择从体内和体外两个方面来观察雷公藤内酯醇对m管平滑肌细胞增殖的影响，旨在评价雷公藤内酯醇作为防治再狭窄的中药制荆的潜在价值。【方法11．组织块贴壁法原代培养SD大鼠血管平滑肌细胞，用细胞计数法观察平滑肌细胞增殖抑制试验，流式细胞术分析细胞周期，RT-PCR法检测原癌基因mRNA

5、表达，蛋自质印迹实验评价雷公藤内酯醇对平滑肌细胞增殖的信号传导通路的影响。2．培养人脐静脉内皮细胞，以细胞计数、ELISA和RT-PCR为主要研究方法，探讨雷公藤内酯醇对血管内皮细胞的影响。3．建立兔血管成形术后再狭窄模型，随机分为3组，植入裸支架或不同浓上海第二医科大学博上学位论文度的雷公藤内酯醇涂层支架。造模4周后，取支架段血管切片，进行图像分析，同时监测手术前后各组动物肝肾功能、血脂和肌酸激酶的变化。用RT-PCR方法检测局部血管组织中TGF—BI的mRNA表达。【结果】1．观察24小时、48小时

6、和72小时发现，雷公藤内酯醇和雷帕霉素对血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞的增殖有抑制作用，且达到统计学差异。细胞周期分析显示随着雷公藤内酯醇剂量逐渐增加，s期细胞逐渐减少，当雷公藤内酯醇剂量达到50rim时，细胞周期进展完全被阻滞，细胞多处于G0／G1期。同样，雷帕霉素随着剂量的增加，能阻止血管平滑肌细胞由G1期向S转化，使细胞处于G0／G1期。霄公藤内醅酵药物于预可使乎滑肌细胞原癌基因c．10s的mRNA表达减少，抑制细胞内信号传导通路ERKl／ERK2磷酸化蛋白的表达，抑制pRb磷酸化蛋白的表达，丽细胞

7、周期素依赖蛋白激酶抑制因子P21“”过表达。2．观察24小时、48小时和72小时发现，雷公藤内酯醇和雷帕霉素对血清诱导的人脐静脉内皮细胞的增殖有抑制作用，且达到统计学差异。对于平滑肌细胞有相同抑制作用的雷公藤内酯醇和雷帕霉素相比，对内皮细胞增殖的抑制作用无显著性差异。当雷公藤内酯醇与雷帕霉素干预后eNOS基因mRNA表达下降，当雷公藤内酯醇浓度达到50nM时，eNOSmRNA表达明显降低。用不同剂量的雷公藤内酯醇和雷帕霉素药物千预，人脐静脉内皮细胞培养液中的wF分泌无显著性差异。3．雷公藤内酯醇涂层支架

8、植入前后，实验兔的肝肾功能和血脂水平无明显改变。RT-PCR检测发现血管组织中TGF-13l的mRNA表达，在雷公藤内酯醇涂层支架组被明显抑制。支架植入4周后，雷公藤内酯醇涂层支架组与裸支架组相比，管腔面积增加，新生内膜面积减少，面积狭窄百分比显著降低。[结论]雷公藤内酯醇能显著抑制血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞增生，阻断平滑肌细胞由G0／G1期向S期的转化，使细胞停滞于G0／G1期。雷公藤内酯醇通过下调原癌基因c—fos的mRNA表达，抑制