Ad-ING4-IRES-IL-24双基因共表达载体的构建及表达

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1、盛伟华等Ad-ING４-IRES-IL-２４双基因共表达载体的构建及表达第８期·７０１·doi：１０．３９６９／j．issn．１０００-４８４X．２０１１．０８．００６·肿瘤免疫学·①Ad-ING4-IRES-IL-24双基因共表达载体的构建及表达②②②盛伟华谢宇锋缪竞诚顾范博单云波朱晔涵陈华昕杜贤荣杨吉成（苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室，苏州２１５１２３）中国图书分类号R392．11文献标识码A文章编号1000-484X（2011）08-0701-08［摘要］目的：构建IRES介导的携带人肿瘤生长抑制因子４（ING４）和人白介素２４

2、（IL-２４）双基因的重组腺病毒共表达载体（简称为Ad-ING４-IRES-IL-２４），研究其表达产物对A５４９肺癌细胞生长的影响。方法：将PCR扩增的IRES、ING４和IL-２４基因片段分别插入pAdTrack-CMV载体中构建pAdTrack-CMV-ING４-IRES-IL-２４双基因共表达重组转移载体。按腺病毒载体常规构建方法获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy-１-pAdTrack-CMV-ING４-IRES-IL-２４，并在QBI-２９３A包装细胞中进行包装和病毒扩增。将扩增后的Ad-ING４-IRES-IL-２４腺病毒感染

3、A５４９肺癌细胞，并用RT-PCR和Westernblot法鉴定ING４和IL-２４基因在QBI-２９３A细胞或A５４９肺癌细胞中的表达，MTT法和流式细胞仪检测其对A５４９肺癌细胞生长抑制和诱导凋亡的功能和抑癌增效作用。结果：DNA测序结果显示pAdTrack-CMV转移载体中插入的ING４、IRES和IL-２４片段的序列与GenBank报道的完全一致，Ad-ING４-IRES-IL-２４能成功介导ING４和IL-２４基因在QBI-２９３A和A５４９细胞中表达，不仅能明显抑制A５４９肺癌细胞生长和诱导其凋亡（７２小时生长抑制率为６２畅８２

4、％±０畅６５％，凋亡率为１９畅４０％±１畅２９％），而且与Ad-ING４-IRES（７２小时生长抑制率为４２畅３１％±０畅４３％，凋亡率为１３畅３０％±１畅８５％）和Ad-IRES-IL-２４单基因组（７２小时生长抑制率为４７畅４４％±０畅３９％，凋亡率为１２畅４０％±１畅０５％）相比具有显著性差异（P＜０畅０５）。结论：成功构建了IRES介导的Ad-ING４-IL-２４双基因共表达重组腺病毒载体，Ad-ING４-IL-２４不仅能明显抑制A５４９肺癌细胞生长和诱导其凋亡，而且与Ad-ING４和AdIL-２４单基因组相比具有抑癌增效作用。［关

5、键词］腺病毒；ING４；IL-２４；肺癌；肿瘤基因治疗Constructionandexpressionofadenovirus-mediatedING4andIL-24co-expressionSHENGWeiHua，XIEYuFeng，MIAOJingCheng，GU-FanBo，SHA-NYunBo，ZHUY-eHan，CHENH-uaXin，DU-XianRong，YANGJiCheng．CellandMolecularB-iologyInstitute-，CollegeofMedicine，SoochowUniversity，Su

6、zhou２１５１２３，China［Abstract］Objective：Toconstructarecombinantadenoviralvectorcarryingandco-expressinghumaninhibitorofgrowth４（ING４）andhumaninterleukin-２４（IL-２４）mediatedbyinternalribosomeentrysite（IRES）（referredtoasAd-ING４-IRES-IL-２４）andexploreitsef-fectonthegrowthofA５４９humanl

7、ungcarcinomacellsinvitro．Methods：TheIRES，ING４，andIL-２４fragmentswereamplifiedbyPCRusingpGEZ-Term，pcDNA３．０-IL-２４，andpcDNA３．０-ING４plasmidsastemplatesandsubclonedintopAdTrack-CMVtransfervectortoformpAd-Track-CMV-ING４-IRES-IL-２４，respectively．ThepAdTrack-CMV-ING４-IRES-IL-２４trans

8、fervectorlinearizedwithPmeⅠdigestionandpAdEasy-１backbonevectorwerefurthercotransformedint