XRCC3基因多态性与宫颈癌发病风险的关系

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1、XRCC3基因多态性与宫颈癌发病风险的关系作者：肖洪玉,吴文清,包小梅,谢红艳单位：广东医学院附属南山医院妇产科【摘要】目的：研究X线修复交叉互补基因3（XRCC3）Thr241Met多态性位点在广东人群中的分布，并分析其多态性与宫颈癌发病风险的关系。方法：采用病例－对照研究方法，应用PCR-RFLP检测158例宫颈癌患者及年龄相匹配的164例正常人群XRCC3Thr241Met多态性位点基因型及等位基因，并分析该位点与宫颈癌发病风险的关系。结果：Thr241Met基因型和等位基因频率在病例组和对照组中的分布差异有统计学意义（P＜0.05），等位基因Met可能增加个体患宫颈癌的风险（

2、OR=1.983，95%CI＝1.364～2.883，P=0.000），提示Thr241Met多态性可能与个体患宫颈癌风险相关；但Thr241Met多态性与宫颈癌患者临床病理特征无关。结论：Thr241Met多态性可能与宫颈癌风险相关，Met等位基因可增加个体患宫颈癌的风险，但与宫颈癌临床病理特征无关。【关键词】宫颈癌；病例－对照研究；XRCC3基因；遗传多态性宫颈癌是发展中国家最常见的妇科恶性肿瘤之一，过去常认为高危型人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)的感染是导致宫颈癌的主要原因之一，但近年众多的研究表明，个体遗传因素的改变也起着非常重要的作用［1］。X

3、线修复交叉互补基因3(X-ragrepaircross-complementinggroups3，XRCC3)是主要的DNA修复基因之一，其编码的蛋白质参与同源重组修复（HRR）过程，以修复双链断裂损伤的DNA。研究发现该基因C→T（在exon7）变异，导致第241位密码子Thr→Met的改变。大量研究表明，Thr241Met多态性与恶性肿瘤发病风险相关，携带Met等位基因的个体患乳腺癌、皮肤恶性黑色素瘤、肺癌、膀胱癌等肿瘤的发病风险增加［2-3］。但目前XRCC3Thr241Met多态性与宫颈癌发病关系的研究较少，且研究结果有矛盾之处。本实验拟探讨XRCC3Th

4、r241Met是否与广东人群宫颈癌发病风险相关，以期为宫颈癌的分子发病机制提供可参考的遗传学依据。　　1材料与方法　　1.1研究对象：158例原发性宫颈癌患者及年龄相匹配的164例健康正常对照人群均来自广东医学院附属南山医院病理科，所有对象均为无血缘关系、汉族个体。病例组均为经验丰富的两名病理医师确诊的宫颈鳞状上皮细胞癌患者，对照组为检验科健康体检者。病例组平均年龄（46.8±10.35）岁，对照组平均年龄（47.2±11.49）岁，两组差异无统计学意义（P>0.05）。根据国际妇产科协会（InternationalfederationofGynec

5、ologyandObstetrics，FIGO）临床分期标准，病例组Ⅰ期78例(49.4%)、Ⅱ期45例(28.5%)，Ⅲ期35例(22.1%)；有淋巴结转移者72例(45.6%)，无淋巴结转移者86例(54.3%)。所有研究对象均为原发性肿瘤，心电图、胸片正常，无其他器官系统疾病；所有个体血常规、血生化指标均在正常范围。对照组及病例组均在治疗前采血2ml，经EDTA抗凝，-20℃保存，酚/氯仿方法提取DNA。　　1.2目的片段的扩增与检测：扩增含XRCC3Thr241Met位点目的片段，根据文献［4］设计引物，上游引物：5′-GGTCGAGTGACAGTCCAAAC-3

6、′；下游引物：5′-TGCAACGGCTGAGGGTCTT-3′；由上海Invitrogen生物技术有限公司合成。PCR反应条件：25μlPCR反应体系，模板DNA2～10ng，上、下游引物各0.4μmol/ml，1.5mmol/mlMgCl2，10×PCR缓冲液2.7μl，1.5UTagDNA聚合酶，100μmol/mldNTP，采用Bio-Rad热循环仪。循环条件：94℃预变性4min，94℃变性45s，61℃复性55s，72℃延伸1min，35个循环，最后再72℃延伸10min。酶切反应体系为20μl

7、，10×PCR缓冲液3.5μl，PCR产物10μl，限制性内切酶NlaⅢ10U，其余用水补足20μl。反应混合液于37℃恒温水浴锅6h，2.0%琼脂糖凝胶电泳（电压130V），紫外灯显色，摄像并分析检测结果。　　1.3统计学分析：采用HWE统计学软件进行Hardy-Weinberg平衡检测，各组间基因型频率和等位基因频率比较采用χ2（PearsonChi-Square）或确切概率法（Fisher′sExac