IFNα1b对人子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖 的影响及机制

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1、IFNα1b对人子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖的影响及机制【摘要】目的研究IFNα1b对子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖及细胞周期的影响。方法不同浓度的IFNα1b作用24h后，通过细胞计数观察对JEC的抗增殖效应，应用流式细胞技术分析细胞周期改变和细胞周期调控因子p21，cyclinA和cyclinE的表达。结果不同浓度的IFNα1b对JEC均有抗增殖作用，其中500U/ml抗增殖作用最强。流式细胞仪（FCM）检测显示S期细胞积累，p21的表达增加和cyclinA表达减少，而cyclinE的表达增加。结论IFNα1b能够抑制子宫内膜腺癌细胞系JEC的增殖，其机理可能

2、与p21的表达增加和cyclinA表达减少，导致S期细胞积累有关。【关键词】子宫内膜腺癌细胞系JECIFNα1bP21cyclinEcyclinA1材料和方法1.1材料人子宫内膜腺癌细胞系JEC来源于临床诊断为子宫内膜腺癌Ⅳ期患者的腹水，由遵义医学院微生物学教研室建立培养。IFNα1b为深圳科兴生物制品有限公司产品。cyclinE、cyclinA、p21试剂盒均购自天津天象人生物有限公司。PI为美国Sigma公司产品。1.2方法1.2.1细胞培养JEC置入含有10%小牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的RMPI1640培养液中，放

3、在37℃、5%CO2的孵箱中培养。取对数生长期细胞，以1.0×105细胞/孔加入24孔培养板或培养瓶中培养24h，换成含3%小牛血清培养液的0U/ml,100U/ml,500U/ml,2000U/mlIFNα1b使用液孵育24h，进行检测。每组设3个平行孔。1.2.2细胞计数细胞培养在24孔培养板中，经0.25%胰酶消化，冷PBS吹打成单个细胞，细胞计数板计数。1.2.3细胞周期分析采用流式细胞仪。细胞培养在培养瓶中，经0.25%胰酶消化，冷PBS吹打成单个细胞，70%冷乙醇固定，加入50ug/mlPI染液1ml,4℃避光染色30min,上机分析

4、。1.2.4cyclinE的检测细胞培养在培养瓶中，经0.25%胰酶消化，冷PBS吹打,4%多聚甲醛固定20min，0.1%TritonX100孵育10min，加兔抗人cyclinE单克隆抗体37℃孵育2h，漂洗离心后，用山羊抗兔IgGFITC标记，4℃，1h，漂洗离心后，FCM检测。1.2.5cyclinA和p21的检测细胞培养在培养瓶中，经0.25%胰酶消化，冷PBS吹打,4%多聚甲醛固定20min，0.1%TritonX100孵育10min，加鼠抗人一抗37℃孵育2h，漂洗离心后，用山羊抗鼠IgGFITC标记，4℃，1h，漂洗离心后，FCM检测。1.2.6试

5、验结果以均数±标准差(±s）表示，SPSS11.5统计软件进行处理，显著性差异以P＜0.05为准。2结果2.1IFNα1b对JEC增殖的影响随浓度的增加，细胞数量明显减少，在500U/ml时抗增殖作用最强。2000U/ml有抗增殖作用，但抗增殖能力下降,见表1。表1IFNα1b作用24h后对JEC增殖的影响*相邻浓度比较P<0.012.2细胞周期的分析随IFNα1b浓度增加，S期细胞数量相应增加，呈剂量依赖关系。0U/ml组和100U/ml组G0/G1期细胞数量没有差异(P>0.05)；500U/ml组和2000U/ml组G0/G

6、1期细胞数量没有差异(P>0.05)；而500U/ml组G0/G1期细胞数量少于100U/ml组，差异有显著性(P<0.01),见表2。2.3p21表达随IFNα1b浓度增加，p21含量增加，在500U/ml表达最高，而在2000U/ml表达水平降低，见表3。2.4cyclinE表达随IFNα1b浓度增加，cyclinE含量增加，在500U/ml时表达最高，而在2000U/ml表达水平降低，见表4。表2不同浓度IFNα1b作用24h后细胞周期各时相分布3讨论由于不同的IFNα亚型抗癌能力有差别[2]，本研究探讨IFN

7、α1b对子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖的影响。IFNα1b在一定的范围内随浓度的增加抗增殖能力增强，呈剂量依赖性关系；超过一定范围后，随浓度继续增加，抗增殖能力下降。这与前期实验中IFNα抗增殖作用随浓度升高而增强的结果有区别[1]。细胞周期是细胞增殖的基础，故我们检测IFNα1b给药后细胞周期时相分布的变化。结果显示随浓度的增加，S期细胞积累，这可能是IFNα1b抑制JEC细胞增殖主要原因。由于S期细胞积累呈剂量依赖性关系，推测随着给药时间的延长，抗增殖能力