上皮性卵巢癌细胞增殖状态与肿瘤血管生成关系的研究

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1、上皮性卵巢癌细胞增殖状态与肿瘤血管生成关系的研究【摘要】目的探讨上皮性卵巢癌不同分级、不同临床分期细胞增殖状态及肿瘤微血管密度（MVD）以及两者之间的关系。方法应用增殖细胞核抗原（PCNA），采用SABC法，检测细胞增殖状态并计算细胞增殖指数（PI）。采用FⅧ相关抗原，应用SABC法，检测上皮性卵巢癌肿瘤微血管密度。应用Spearman等级相关法检测PI与MVD的相关性。结果（1）45例上皮性卵巢癌中PI均值为35.7±10.9，MVD均值为31.7±11.2(400倍镜下)。不同临床分期、组织分级的PI无显著性差异（P>0.05）。MVD在不同的卵巢癌临床

2、分期中的差异有显著性意义（P<0.05），临床Ⅲ～Ⅳ期肿瘤MVD高于临床Ⅰ～Ⅱ期（P<0.05）。（2）上皮性卵巢癌中PI与MVD无明显相关（P＞0.05）。结论肿瘤血管生成是上皮性卵巢癌发展的伴随条件，随着卵巢癌的进展，肿瘤血管生成是增加的。上皮性卵巢癌中细胞增殖状态与肿瘤血管生成无明显相关。肿瘤血管生成的机制与肿瘤细胞增殖的机理可能不同。【关键词】上皮性卵巢癌细胞增殖肿瘤血管生成细胞周期调控失常和异常增殖可能导致肿瘤的发生和发展，肿瘤细胞的增殖水平可能反映了人类肿瘤的恶性程度［1］。另外恶性肿瘤进行性生长依赖肿瘤血管生成，为肿瘤细胞提供营养和排出代谢产物

3、。故有研究者认为肿瘤血管生成可能影响肿瘤细胞的增殖［2］。上皮性卵巢癌中肿瘤细胞增殖状态与肿瘤血管生成关系鲜见报道。本文用增殖细胞核抗原（PCNA）对45例上皮性卵巢癌进行了免疫组化染色，检测细胞增殖状态，采用ＦⅧ相关抗原，观察上皮性卵巢癌肿瘤微血管密度，并探讨它们之间的关系。1材料与方法1.1标本45例卵巢组织标本取自同济医学院两所附属医院1996年10月至1999年10月之间的手术标本。平均年龄54.2±9.6岁（浆液性卵巢癌36例，粘液性卵巢癌6例，子宫内膜样癌2例，透明细胞癌1例）术前均未化疗。切除的标本经10％福尔马林固定，石蜡包埋，4μm连

4、续切片后，进行免疫组织化学染色。1.2实验方法与步骤1.2.1PCNA的检测石蜡切片（4μm）常规脱蜡水化，胰蛋白酶消化。微波抗原修复。单抗PCNA（Calbiochen公司）,4℃冰箱过夜。阴性对照用PBS溶液代替。加入二抗后，滴加SABC（博士德生物工程公司）试剂，DAB显色。1.2.2MVD检测石蜡切片常规脱蜡水化，0.1％胰蛋白酶消化。待检标本、阳性对照标本加入兔抗人FⅧ因子相关抗原抗体(Sigma公司），阴性对照用PBS溶液代替，4℃孵育过夜。标本加二抗后，滴加即用型SABC试剂，DAB显色。1.3结果判定增殖指数（proliferation

5、index,PI），为显微镜放大400倍下,计数增殖细胞占细胞总数的百分比。随机检测10个视野，至少计数20000个细胞。计数微血管时先用低倍物镜（8×）进行观察，寻找微血管最多的区域，然后用高倍物镜（40×）计数3个视野，求其平均值，计做微血管密度MVD(micovesseldensity)。(两人分别计数，取均值，有争议时请第三者判断。)1.4统计方法采用SPSS9.0软件包进行F检验和相关分析法。P＜0.05，认为差异有显著意义。2结果2.1上皮性卵巢癌中肿瘤细胞增殖指数PI及肿瘤微血管密度MVD检测结果PCNA阳性染色呈棕黄色

6、的细颗粒状，主要位于细胞核。上皮性卵巢癌中，肿瘤微血管分布杂乱无章且可见多个或单个棕色内皮细胞。有或无管腔MVD为31.7±11.2。临床Ⅰ～Ⅳ期增殖指数PI，经F检测，P＞0.05，无显著性差异。而肿瘤微血管密度MVD，经F检验，P＜0.05，差异有显著性意义,见表1。表1上皮性卵巢癌不同分期PI、MVD比较Ⅰ～Ⅳ期比较*P>0.05**P<0.0545例上皮性卵巢癌不同组织分级增殖指数PI及肿瘤微血管MVD比较，P＞0.05，差异无显著性意义，见表2。表2上皮性卵巢癌不同组织分级PI、MVD比较3讨论3.1PCNA在上皮性卵巢癌中表达的意义PCNA是一分

7、子量为36000的酸性蛋白，定位于细胞核中，其功能是DNA多聚酶的辅因子，在DNA主链复制、修复，正常细胞周期循环等都是必不可少。PCNA于G1晚期出现，S期达高峰，G2期下降，而在M期和G0期则无PCNA。因此，PCNA常作为测定组织细胞增殖水平的指标之一。有作者研究表明，从正常、良性、交界性到恶性卵巢上皮肿瘤中，PCNA表达是增高的。并且，PCNA在上皮性卵巢癌中表达与组织分级有关而与分期无关。也有研究者报道，PCNA表达与分期有关，临床期别高的卵巢癌细胞增殖快，PCNA检测可作为上皮性卵巢癌的预后指标［3］。本文研究结果表明，PCNA的表达与上皮性卵巢

8、癌临床分期及组织分级无关。3.2上皮性卵巢癌中肿瘤血