D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液NO的影响

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1、D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液NO的影响中国海洋药物2000年第3期第19卷研究报告作者：宋晓梅　刘栋　管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛　266011）；刘栋　管华诗（青岛海洋大学药物与食品研究所，青岛　266003）关键词：D-聚甘酯，皮层神经元，NO，脑缺血　　摘要　体外培养胎大鼠皮层神经元，利用低糖低氧环境造成脑缺血模型，观察了D-聚甘酯对低糖低氧所致NO释放的影响。结果表明D-聚甘酯5，25，50mg·L－1不能抑制低糖低氧所导致的NO释放的增多。提示D-聚甘酯可能以非NO途径发挥其脑缺血保护作用。EFFECTSOFD-MANNORO

2、NICATEONEXTRACELLULARNOLEVELINPRIMARYCULTUREDRATCORTICALNEURONSSongXiaomei　　（DepartmentofPharmacyofQingdaoMunicipalHospital,Qingdao266011)　　LiuDong　　（DepartmentofPharmacyofQingdaoMunicipalHospital,Qingdao266011)　　GuanHuashi　　（DepartmentofPharmacyofQingdaoMunicipalHospital,Qingdao266011)

3、　　ABSTRACT　TheeffectsofD-Mannuronicateonextracellularnitricoxide(NO)levelswereinvestigatedinprimaryculturedratcorticalneuronalcells.NOwasmeasuredbyusingspectrometry.TheresultsshowedthatD-Mannuronicate5、25、50mg·L-1couldnotinhibittheelevationofNOinprmaryculturedneuronsthatwereexposedfor8h

4、tohypoxicandhypoglycemicsituation,suggestingthatD-Mannuronicatedon?texertneuroprotectiveeffectsbyinfluencingtheproductionofNOafterischemicdamage.　　KEYWORDS　D-Mannuronicateprimarycorticalneurons,NO,brainischemia　　近年来，NO作为非经典的神经递质、细胞功能调节因子或信使，其在神经系统正常功能和疾病中，特别是在脑缺血中的作用日益受到重视［1］。NO参与调节外周及脑

5、血管的舒缩活动，因而在脑血流的调节中起着十分重要的作用。大脑皮质、海马和纹状体注入谷氨酸或NMDA引起的神经元损伤可被一氧化氮合酶（NOS）抑制剂所减轻，表明脑缺血所致的NMDA的神经毒作用是由NO介导［2］。脑缺血后，细胞内Ca2＋浓度升高可导致神经毒作用，此作用可被NO前体L-精氨酸（L-Arg)或NOS抑制剂L-NNA所阻断，提示Ca2＋是脑缺血损伤中的起始信使，最终是NO导致神经元的死亡［3］。但NO又具有增加脑血流、扩张血管和抗血小板聚集的作用，因此NO又可对脑缺血引起的损伤起一定的保护作用［4］。所以NO在脑缺血的病理机制中具有双重作用。　　D-聚甘酯是从

6、褐藻中得到的一种低分子量、低抗凝硫酸糖胺聚糖类化合物，是经青岛海洋大学海洋药物与食品研究所在藻酸双酯钠（propyleneglycolalginatesodiumsulfate,PSS)的基础上经过结构改造而成的。D-聚甘酯属酸性多糖，其相对分子质量为4000左右。我所初步药理学实验证实，D-聚甘酯具有抗脑缺血的作用，但其确切的机理尚不清楚。有资料表明D-聚甘酯的类似物肝素可以影响NO的产生，从而影响血管的反应节律和血流量，起到预防和治疗动脉粥样硬化的作用［5，6］。为了进一步阐明D-聚甘酯抗脑缺血的作用机制是否与NO有关，我们利用分光光度法研究了D-聚甘酯对原代培养

7、的胎大鼠皮层神经细胞外液NO水平的影响。　　1　材料　　1.1仪器　752紫外可见分光光度计，上海分析仪器厂；倒置显微镜，Olympus;24孔培养板，Costar。　　1.2　动物　清洁级Wistar孕鼠，孕期13～15d，北京医科大学实验动物中心提供。　　1.3　药品与试剂　D-聚甘酯（D-Mannuronicate)，由青岛海洋大学海洋药物与食品研究所提供。DMEM培养基，DMEM低糖培养基，GIBCO；多聚赖氨酸，Sigma;对氨基苯磺酰胺（sulfanilamide);N-(1-萘基）乙二胺盐酸盐（N-（1-naphthyl)-ethlen