超氧化物歧化酶样活性的测定方法

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第3卷第2期衡水师专学报Vo1．3．No．22001年6月Jc~,al0fHNormalCollegeJm2001超氧化物歧化酶样活性的测定方法国占生(衡水师范专科学校化学系，河北衡水053000)摘要：超氧化物歧化酶(印D)样活性的科定主要依赖于超氧阴离干自由基(一·)在不同夺件下的受控产生，目前产生一一的方法主要有鄙革三醉卣氧化法、肾上腺素卣氧化法、黄嚅呤氧化酶法、楮黄素光Jll}法、碱性二甲基亚砜法和碱性连二亚硫酸蚋法等，各种方法的模型体系对SOD活性的洲定姑果均有不同的准确性和夏敏度。关键词

2、：超氧化物歧化酶；活性；洲定方法；夏敏度中图分类号：0611．62文献标识码：A文章编号：10o8—6900[2001}02—0039—03超氧阴离子自由基(o2一·)是有毒的活性氧之SOD或其模拟物时，因清除掉一定量的02一·而使邻一几乎所有的高等生物体内都有02一·产生，02一·苯三酚的自氧化受到抑制，使自氧化速率减小，从其，受控产生对机体有益，而02一·的异常产生则会直接减小的程度可求得SOD的活性。实验表明，邻苯三或间接地损伤细胞，导致机体衰老、炎症、癌症及某酚的白氧化速率随溶液pH值、邻苯三酚浓度、温度些自由基疾病_l_2J。令人欣慰的

3、是生物进化赋予了的升高而增大，其中pH值、邻苯三酚浓度的影响尤生物体有效的02一·清除剂——超氧化物歧化酶为显著。在实际操作中，一般把pH值、邻苯三酚浓度(SOD)，以使正常生理条件下的生物体免受02一·的和温度分别选在8．O～8．3，0．1-0．2rrrrd几和25℃左右，该条件对于适应SOD的最大活性、控制02一·损害。自从1969年Mcord和Fridovich首次从牛红细胞中发现并提取出SOD[3以来，特别是近些的稳态浓度及读得大小台适的吸光度都是有利的。年，有关SOD在体内和体外的活性测定、SOD的开测试波长和缓冲液的选择与该方法的灵敏

4、度有很大发应用及对SOD的模拟等研究方兴未艾。有关这关系，邹国林等_4J分别在Tns—HCI(pH=8．2)、些工作都涉及到S00样活性的测定方法，因而也就K2一KH2P(pH=8．34)、Trls一二甲胂酸钠需要产生02一·的模型体系和02一·的检测手段。一HCI(pH=8．2)、Na飓一柠檬酸(pH=8．0)、1邻苯三酚自氧化法NaCI-I一ⅪP((pH=8．0)和巴比妥钠一Ha(pH=邻苯三酚在酸性条件下是稳定的，在碱性条件8．2)六种缓冲溶液中发现，用325m比选用420m下会自动氧化，其白氧化机理比较复杂，在其白氧化使灵敏度有不同程度的

5、提高。对于这些缓冲溶液，过程中，不断释放出02一，02一·又可进一步促进白尤其在"Iris—HC1、K2}q—KH2Pq中自氧化速氧化过程，生成有色中间产物，先生成的中间产物又率最大，由于a一对SOD的活性有一定抑制作用，不断被氧化成其他中间物，由此邻苯三酚在自氧化邓碧玉等L5认为用K2HPO~一KH2Pq更有利于提过程中出现一系列颜色变化。在邻苯三酚的白氧化初高SOD对02一·的竞争力，从而可减小SOD的用量。期，中间物的积累浓度(或吸光度)在反应开始30-45S如果溶液中夹杂有重金属离子，常在缓冲溶液中加后与时间呈线性关系，一般线性时间维持4

6、rain左入一定量的二乙基三氨五乙酸等螯台剂。右。测得邻苯三酚在不同时刻(每30S)白氧化中间2肾上腺素自氧化法产物的吸光度，并对时间作图，可求得邻苯三酚的自肾上腺素也是多酚衍生物，在碱性条件下会自氧化速率，当向邻苯三酚白氧化体系中加人一定量动氧化，其中涉及到02一·的链式反应，可被SOD抑牧稿日期：2OOO一12—28作者篱介：国占生(1965一)。男．河北武邑县人。者水师专化学系讲师维普资讯http://www.cqvip.com40衡水师专学报第3卷制，肾上腺索经多步转化为肾上腺素红。肾上腺索4核黄素光照法红有480DEll和320m两个吸

7、收峰。McCord和在有氧存在的条件下，核黄索发生光还原产生F如vichIJ利用其480rm峰测定了SOD活性，该Of·，Of·再还原NBT生成蓝色的甲艚，于是测法简单、快速。但由于该峰弱且宽，肾上腺素红也不定体系在560DEll的吸光度可阐明O2一-的产生及被稳定，致使灵敏度一般。魏重琴等L6J则认为，虽然抑制的情况。依此原理建立的SOD活性测定法可480nm峰有诸多弊端，但若严格控制测试实验在用于粗提酶及聚丙烯酰胺凝胶上SOD活性的测定，2．5rain内完成，照样可以提高灵敏度和准确度，因实验数据重现性良好。Beauchamp等L8设定的体系

8、为3min后吸光度才开始下降，这样便免去了非用中含有1．17x10n-d／L核黄索、0．01rnd／L甲硫氨酸、紫外分光光度计不可的限制