茶多酚逆转肿瘤多药抗药性和抑制胃癌前病变的研究

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1、华东理工大学博士学位论文第1页茶多酚逆转肿瘤多药抗药性和抑制胃癌前病变的研究摘要少对肿瘤细胞在化疗过程中表现出的多药抗药't(Multidrugresistance,MDR)这一肿瘤治疗中的最大难题，本文研究了茶多酚(Teapolyphenol,TP)逆转MDR的现象和作用并对其调控机制进行了探讨。通过体外实验证明TP不仅能抑制肿瘤细胞的生长与增殖、同时能够提高抗药型肿瘤细胞对化疗药物敏感性即具有逆转MDR现象的作用。本研究首次建立了利用高效液相色谱(HPLC)定量测定MDR细胞中阿霉素(Doxorubicin,DOX)浓度

2、的方法。并首次利用该方法考察TP对MDR的逆转效果，证明仰通过提高抗药型肿瘤细胞中实际作用的抗癌药物浓度介导了其对MDR的逆转作用。本研究还首次建立了利用荧光酶标仪考察细胞内药物流入和流出情况的方法，揭示出高药物流出速度和低药物流入速度是导致MDR细胞内抗癌药物浓度降低，并进而产生抗药性的原因。利用该方法考察TP对抗药型细胞内药物流入和流出情的影响，证明改变抗癌药物流入和流出MDR细胞的速度是TP逆转MDR现象的原因本究首次证明了MDR现象是一个氧自由基敏感性调节过程，氧自由基能够通过其在细胞内的相对浓度的变化发挥其调节MD

3、R现象的作用。因而TP通过其抗氧化能力参与介导了它们对MDR的逆转作用。本研究还首次构建了高效表达人MDRI基因的核昔酸结合区域基因片段(NBD)靶蛋白的表达系统，通过比色法测定ATPase水解ATP的能力，反映靶蛋白NBDATPase水平的高低。该表达系统和实验方法不仅可以用来评价和验证MDR逆转剂对MDR现象的逆转作用，而且可以用来大规模筛选MDR逆转剂。研究发现TP剂量依赖性的抑制ATPase活性，说明TP可以通过抑制P-gp糖蛋白的ATP酶活性的方式阻断P-gp糖蛋白对抗癌药物的溢出作用从而发挥其逆转MDR的作用。通

4、过RTPCR方法还证明TP对MDRI基因的转录水平具有抑制作用，提示TP从分子水平上调节MDRI基因表达水平是其逆转MDR现象的主要原因。在裸鼠体内成功地移植了人癌细胞KB-3-1和KB-A-1，为进一步的筛选和评价工作创造了条件.同时利用该模型证明TP具有体内逆转MDR的作用，而且TP本身无毒副作用也不会增加抗癌药物的毒副作用，提示TP是一种较好的体内MDR逆转剂。本研究通过诱导化学诱癌剂建立的大鼠胃癌前病变模型证明，TP具有缓解诱癌剂所造成的胃粘膜的损伤的作用，说明，TP可在癌前病变阶段阻止癌症的发生。通过流式细胞仪测定

5、的实验结果证明，TP可以降低诱癌剂作用而升高的细胞凋亡和细胞增殖指数，即TP可使诱癌剂作用而打破的细胞增殖与凋亡之间的平衡趋向正常水平，并可使细胞滞留GdG，期，说明TP可以在恶性肿瘤发生的起始阶段发挥抑制作用，并且这种抑制作用和第I页华东理工大学博士学位论文TP对细胞周期中增殖与凋亡平衡的调节有关。关键词:多药抗药性茶多酚表z子酸醋阿霉素逆转剂华东理工大学博士学位论文第III页StudiesontheModulationofMultidrugResistanceandtheChemopreventionofGastricP

6、recancerousLesionbyTeaPolyphenolsABSTRACTInordertoovercomemultidrugresistance(MDR),whichisamajorobstacletosuccessfulcancerchemotherapy,inthisstudy,theefectandtheunderlyingmechanismsofteapolyphenol(TP)onthemodulationofmultidrugresistancewereinvestigated.WithMTTassay

7、,itwasfoundthatTPcouldnotonlyinhibitthegrowthandproliferationoftumorcells,butalsoincreasethesensitivityofdrug-resistancecellstoanti-tumordrugsandreverseMDRphenotype.ItwasthefirsttimetoestablishtheHPLCassayto.examinetheintracellularconcentrationofdoxorubicin(DOX)inM

8、DRhumancarcinomacells,andthismethodwasfirstlyusedtoanalyzethereversalefectofTPonMDR.丁heresultsindicatedthatTPcouldincreasetheintracellularactinga