家蚕浓核病毒BmDNV3基因组结构与功能的研究

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1、江苏大学博士学位论文家蚕浓核病毒BmDNV-3基因组结构与功能的研究姓名：王永杰申请学位级别：博士专业：食品科学指导教师：陈克平;杨胜利20070609江苏大学博士学位论文：家蚕浓核病毒BmDNV-3基因组结构与功能的研究蛋白，而正链上开放阅读框(ORFl)可能编码病毒的结构蛋白。3．比较BzDNV一3和B物DNV一2(Yamanashiisolate)基因组全序列，两者VDl的同源性为98．4％，VD2同源性达97．7％，并且有228个碱基的替代、11个碱基的删除和2个碱基插入。比较这两个不同株系病毒的开放阅读框和末端反向重复序列，突变的热点集中在结构蛋白(

2、VDlORF3，VD2ORFl)，VDlORF4和末端反向重复序列上。本研究中的结论为更好地理解家蚕浓核病毒不同株系差异性及其可能的原因，也为研究家蚕浓核病毒进化提供了有益的线索。4．在对VDl基因转录组织结构研究中，Northern杂交显示VDl的左边正链上有1．1kb非结构蛋白和1．5kb结构蛋白这两个转录本，右边的负链上有一个3．3kb非结构蛋白转录本。37和57RACE序列测定结果显示1．1kb非结构蛋白开始于nt290，结束于nt1437。ORFl和ORF2完全位于其中，因此有可能通过核糖体扫描机制在不同的阅读框上翻译两种蛋白NSl和NS2。1．5k

3、b结构蛋白开始于nt1423，结束于nt2931。编码结构蛋白的转录本(ORF3)和编码非结构蛋白的转录本(ORF4)在图距50处拥有10个核苷酸的37端的共同序列。该病毒的转录方式与己报道的其它浓核病毒存在着较大差异。5．该病毒感染的家蚕中肠组织经匀浆、40％(w／w)CsCl。梯度离心和定量PCR，结果显示VDl和VD2两者的浮力密度接近相等，约为1．29g／am3。该病毒的浮力密度比其它浓核病毒明显小，再次说明该浓核病毒的特殊性。从不同梯度等份样品中VDl、VD2的起始拷贝数判断，得出它们可能位于各自不同的病毒衣壳蛋白中。另外，SDS—PAGE电泳分析结

4、果显示Bal)NV一3病毒的衣壳蛋白的分子量为48kDa、55kDa、72kDa和97kDa的4条明显条带，其中53kDa为主要组分。6．在原核表达载体中构建了pET28a(+)-VDlORF437端部分，然后转化到大肠杆菌BL21中。通过IPTG诱导表达后，SDS—PAGE显示在62kDa左右有一特异条带，与预测的蛋白质分子量大小一致。另外，还在杆状病毒表达系统中，构建了重组转座载体pF^舛B。c}tTB-VDlORF437端部分。关键词：家蚕浓核病毒B殇DNV一3，基因组结构，序列分析，转录，定量PCR，结构蛋白，原核表达ⅡABSTRACTDensovir

5、uses(DNVs)aresmallno-envelopedparticlesof18---'26nnlindiameterandtheirgenomesconsistof4’～6．5kbsingle-strandedlinearDNAencapsidatedasplusandminusstrandsinseparatevidons．DNVstendtobehighlyhost—specificandcausedeathofthehostinmostcases．Thecurrentinterestinthemolecularbiologyoftheseviru

6、sesisfosteredbytheirpotentialasmodifiedviruspesticide，andbytheiruseasvectorsfortheexpressionofforeignproteins．Duetoimportantofthesilkwormindustry,manyisolateswereobtainedfromsilkworm，theyweretermedasBmDNV一1(Inaisolate)，BmDNV-2(SakuisolateandYamanashiisolate)，BmDNV-5，BmDNV-3(Chinaiso

7、late)andBmDNV一4(Kenchuinsolate)．BmDNV-3andBmDNV一2(Yamanashiisolate)bothhavebipartitegenomes(VDl，VD2)andhavethesamehostspecies，buttheirvirulenceandthesymptomsofinfectionaredifferent．Inpresentstudies，wereportedthecharacterizationsandpotentialfunctionofBombyxmoridensonucleosisvirustype

8、3．Theresultsareshow