基因转染β肾上腺素受体激酶抑制剂对哮喘小鼠β受体信号转导调节的研究

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1、南京医科大学硕士学位论文基因转染β肾上腺素受体激酶抑制剂对哮喘小鼠β受体信号转导调节的研究姓名：吴艳申请学位级别：硕士专业：呼吸内科指导教师：黄茂20030401南京医科大学硕士学位论文基因转染13肾上腺素受体漱酶抑制剂对哮喘小鼠D受体信号转导调节的研究摘要目的p肾上腺素受体激酶(13ARI(1)磷酸化激活态p受体，是长期应用p受体激动剂导致p受体下调的最主要的原因之一。我们构建在肺部表达pARKl抑制剂(pARKct)的表达质粒，并通过基因转染的方式来研究13ARKct对哮喘小鼠和长期应用D2受体激动剂小鼠肺部D受体信号转导的调节。方法1．取正常小鼠的脑组织作为模板，经RT-PCR

2、取得目的基因，构建以pcDNA3．1为载体的表达质粒。2．建立哮喘动物模型和长期应用p受体激动剂的哮喘动物模型。3．质粒DNA经脂质体的包裹，通过尾静脉注射和气管内滴入的转染途径进行基因转染。4．Western-blot检测基因的表达。放免法检测小鼠肺部的D受体和cAMP的水平。、l结果1．经不同途径转染构建的表达质粒在肺部都有目的基因的表达，但表达的量不同。2．哮喘小鼠，应用p受体激动剂的哮喘小鼠肺部D受体和cAMP水平都有下降，下降的程度不同。3．pcDN乒-13ARKct转染小鼠肺部p受体的数目和cA!VIP水平都有上调。＼1／结论71．构建含有目的基因DARK。抑制剂的质粒在

3、肺部有表达，表达的量与转染途径和DNA的量相关。南京医科大学硕士学位论文2．基因转染15ARKct基因对哮喘小鼠及长期应用D受体激动剂后的哮喘小鼠肺部p受体和cA／VII)的下降都有抑制作用，但DARKct在两者中的作用机理不同。关键词哮喘基因转染D受体cAMPDARKctGpyD受体激动剂南京医科大学硕士学位论文Studytheregulationoffl-adrenergicreceptorconductioninasthmalungbyaB-adrenergicreceptorkinaseinhibitorgenetransferAbstractobjectivePhospho

4、rylationofserineandthreonineresiduesatthecarboxy．terminusoftheagonist-occupied且receptorcatalysedby且ARKlhasbeendelineatedasamolecularmechanismsthatresultin且2-adrenoceptordesensitizationinasthmalung．Constructarecombinationplasmidencodingthecarboxylterminusof13ARKI(13ARKct)whichcontainsthedomainre

5、sponsibleforbindingtothe13v-subunitsofactivatedGproteins(G13Y)，aprocessrequiredfortheactivationofendogenous13ARKl，andstudytheexpressionandinfluenceofobjectivegeneonBreceptorsignalconductionofasthmalungthroughgenetransferinvivo．Method：1．ThecDNAencodingmurine13ARKlresiduesGlP495toLeu689amplifiedu

6、singRT-PCRisinsertedintoaplasmidtoconstructarecombinationexpressionplasmidpcDNA一13ARKct．2．EstablishanasthmaanimalmodelandanasthmaanimaltreatedwithDARagonist．3．Wehavedeliveredlipid-pcDNA-BARKctcomplexesinvivointravenouslyorintratracheallytothelungofanimal．4．Werstem—blotisusedtodetecttheexpressio

7、nofDARKctinlung，thechangesofDARandcAMPareevaluatedbyradioimmunology．Result1．TheexpressionofDARKctinlungwasdetectable．But，theD南京医科大学硕士学位论丈ARKctexpressedmoreinlungofmiceintratrachealdeliveryplasmidinvivothanintravenous．2．Thedown．reg