含人发角蛋白的真皮替代物的研究

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1、第一军医大学硕士学位论文含人发角蛋白的真皮替代物的研究姓名：张宝燕申请学位级别：硕士专业：组织学与胚胎学指导教师：邹仲之20030501中文摘要组织工程化的真皮替代物～般是以胶原作为基质、成纤维细胞作为种子细胞构建的，尚存在移植后血管化和受者自身细胞替代缓慢等缺点。本研究首次将人发角蛋白(humanhairkeratin，HHK)用于真皮替代物的制备，旨在观察它可能出现的优点和缺点，探索它是奇能成为一种效果良好的真皮替代物的添加成分。本研究首先将HHK和胶原一起作为基质成分，以大鼠真皮成纤维细胞(ratdermalfibroblasts，RDF)为种子细胞，通过三维培养在体外构建真皮

2、替代物，然后植入大鼠皮下．采用多种形态学方法进行了观察。一、RDF在含HHK的胶原凝胶中的三维培养研究：RDF经原代、传代培养后，和胶原凝胶混合，置入编织成网状的人发，进行三维培养；以不加人发的RDF一胶原凝胶作为对照。在对照组，培养7天后，凝胶收缩至原初直径的约1／3，而在实验组，人发网限制了凝胶的收缩。在实验组，RDF呈长梭形，顺着人发网提供的张力方向走行，排列有序，I型胶原蛋白免疫组织化学染色显示了位于细胞胞质中的胶原蛋白，提示三维培养中的RDF有合成胶原蛋白的能力。在对照组，RDF排列无序，I型胶原免疫组化染色示RDF胞质阳性。结果表明RDF在两组胶原凝胶中都能合成I型胶原，

3、但在含人发网的胶原凝胶中RDF排列有序，在形态学上与正常真皮接近。二、RDF—HHK一胶原凝胶皮下移植的研究：植入后4天，实验组和对照组的移植块内均可见中性粒细胞和单核细胞浸润，但在实验组的人发周围较为严重。第7天，两组凝胶内的炎细胞浸润均减轻，在人发周围形成了一层巨噬细胞；两组均有血管长入，但在实验组的人发周围血管明显丰富。第lO天，vWF免疫组化显示实验组移植块内的血管明显多于对照组。第2周，多核巨细胞形成包绕人发的鞘样结构。第3、4周，多核巨细胞鞘变得不完整，人发的毛小皮出现破裂；人发周围成纤维细胞呈功能活跃态，形成较多胶原纤维。第5一12周，人发周围的结缔组织进一步扩展，并出

4、现了弹性纤维，凝胶部分不断缩小；人发出现碎裂，但无消失迹象。结果表明，含HHK的真皮替代物的血管化和被受者自身结缔组织取代的情况均优于无HHK的对照组，这可能与人发引起的异物炎症反应有关；但人发长期存在引起的慢性炎症反应和其颜色是需要克服的缺陷。关键词：组织工程皮肤；真皮替代物；成纤维细胞；三维培养；人发胶原纤维ABSTRACTTissueengineeringdermalsubstituteisreconstructedgenerallywithcollagenasthematrixseededwit}lfibroblasts．However,thevascularizationa

5、ndbeingovertakenbythereceptor’Sowntissueisslowaftertransplantation．Inourstudy,weusedfirsttimethehumanhairkeratin(HI-／K1asamatrixcomponenttOpreparethedermalsubstitute，tOobserveitspossiblemeritsandshortcomings，andtOexplorewhetheritcouldbecomeaneffejctivecomponentinthepreparationoftissueengineerin

6、gskin．Weconstructedthelivingdermalsubstituteusingthisnewmatrixembeddedwithratdermalfibroblasts(RDF)，thengrafteditsubcutaneouslyinrats．Byhistologicalandimmunohistochemicalstaining，weobservedthemorphologyofthisthree—dimensionalculturesystemwithhairnet，andexploredtheformationofanet—dermiswhenthede

7、rmalsubstituteconsistingofcollagenandhumanhairwasgraftedsubcutaneouslyinrats．(1)ThestudyofRDFsinthethree—dimenasionalculturewithhumanhairnet．Aftersubcultured3-4generations，RDFsweremixedincollagensolution，intowhichthehumanhairnetwa