人发角蛋白人工神经的免疫学研究论文

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1、人发角蛋白人工神经的免疫学研究论文【摘要】目的探讨人发角蛋白（HHK）人工神经组织相容性，为周围神经（PN）缺损寻求理想的移植修复材料。方法54只健康成年SPF级雄性、IgG，补体C3、C4，T淋巴细胞亚群及T淋巴细胞转化率。结果术后2、8、16周各组血液免疫学指标比较，A、B两组之间均无显著性差别（F=17.56～571.34.freelanhairkeratin(HHK)artificialnerveandofferanideallytransplantedmaterialforrepairingthedefectofperipheralnerve(PN).Metho

2、dsFiftyfour4A，上海生产）。1.3人发角蛋白人工神经制备快速降解HHK36根，外包一层生物膜，制成长度为10mm，直径约1mm人工神经材料，经高温消毒备用。1.4模型建立将54只大白鼠随机分为3组，每组18只，其中A组为实验组，B、C组为对照组。100g/L水合氯醛（350mg/kg）对大鼠进行腹腔注射麻醉。麻醉成功后取俯卧位将大白鼠固定于操作台上，取右下肢后外侧切口，显露坐骨神经及其分支，确认胫神经，切除一段长10mm胫神经，在16倍手术显微镜下，A组大鼠用人工神经材料桥接胫神经，两断端各用90显微缝线将人工神经生物膜和神经外膜间断缝合6针。按以上方法，

3、C组大鼠取A组大鼠之切除胫神经进行桥接。B组大鼠将切除神经倒转180°，桥接于断端。术后所有大鼠均腹腔注射青霉素4万单位预防感染。1.5术后取材及检测分别于术后2、8、16周各组随机抽取6只大鼠，按照前法腹腔麻醉后，于左颈前分离左颈总动脉，取血3mL置EDTA抗凝管内，送实验室立即进行免疫荧光染色和固定，标记后即上流式细胞仪行T淋巴细胞亚群检测。取血2mL进行体外培养，用PHA进行刺激，进行T淋巴细胞转化试验。取血6mL置干燥管内，静置后送实验室采用免疫速率散射比浊法行免疫球蛋白IgA、IgM、IgG及补体C3、C4检测。1.6统计学处理各组数据采集整理后，以均数±标准差表

4、示，应用SPSS11.0统计软件进行方差分析。2结果术后2、8、16周各组大鼠血液免疫学指标比较，A、B两组之间无显著性差别（F=17.56～571.34，q=0.00～2.09，P0.05），C组与A、B两组比较均有极显著性差别（q=7.04～41.47，P0.01）。见表1～3。表1术后2周各组免疫指标检测结果（表2术后8周各组免疫指标检测结果表3术后16周各组免疫指标检测结果3讨论3.1PN损伤修复的发展PN损伤常导致神经断端的缺损，两神经断端存在间隙不利于再生轴突的生长，直接缝合神经两断端往往困难，且吻合端张力较大，影响其血液供应及修复5，寻求理想的桥接材料成为PN

5、损伤修复的关键。自体神经富含雪旺细胞和神经束结构，被公认为是修复神经缺损的黄金标准6，但自体神经移植必然伴有供区的功能受损，而且可供移植的神经来源有限。异体神经移植由于移植后免疫排斥反应不能解决，并且可能引起疾病的传播以及医学伦理方面的障碍，至今尚未广泛用于临床。随着组织工程学迅速发展，使用神经移植替代物(人工神经)来代替自体神经移植，多年来成为人们研究的重点。FA、IgG和补体C3、C4在血液中含量较高，在机体的体液免疫中起着重要作用。CD+4代表T辅助细胞，CD+8代表T抑制细胞，CD+4/CD+8比值的变化可以判断细胞免疫功能，反映免疫调节功能变化。T细胞转化试验主要

6、用于体外检测T细胞的生物学功能，反映机体的细胞免疫水平。坐骨神经是建立PN损伤与修复的良好实验模型，常用的方法是切断坐骨神经主干。以往实验中发现，切断坐骨神经主干后，同时切断了前往其所支配的组织器官的神经纤维，远端的大部分肢体失去了神经营养和皮肤感觉。术后远端肢体陆续出现皮肤溃疡，部分用来实验的大白鼠甚至自食或相互咬掉实验侧肢体，使实验失败。而且经久不愈的肢体溃疡也严重影响实验材料检测的准确性，尤其对体液免疫和细胞免疫指标检测会产生偏差，影响实验数据的准确性。本实验显示成年大白鼠胫神经由坐骨神经分出至远端分叉处长度超过15mm，解剖清晰，和腓总神经比较形态差别明显，易于辨认

7、，切断坐骨神经分出的胫神经可以完全阻断腓肠肌的神经支配，最大限度地保存肢体其他组织的神经营养和皮肤感觉，尽可能避免大白鼠出现肢体溃疡及撕咬肢体现象，保证实验模型建立的成功。同时，术后早期预防性应用一次抗生素，可防止切口感染，提高了实验数据的准确性。3.3人发角蛋白人工神经良好的组织相容性植入物进入机体后，血液免疫球蛋白、C3、C4、CD+4/CD+8及T淋巴细胞转化率水平升高，往往提示发生排斥反应。本实验结果显示，术后2、8、16周各组大鼠免疫球蛋白IgA、IgM、IgG及补体C3、C4检测结果比较，A、B两组间差