同种异体胎兔软骨细胞治疗膝骨性关节炎的实验研究

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1、主查塑墨一——————————_—————————————_————_————-———_———————一同种异体胎兔软骨细胞移植治疗膝骨性关节炎的实验研究摘要目的：本实验通过应用同种异体胎兔软骨细胞经体外培养、扩增，与兔血纤维蛋白凝胶形成混合物，对轻中度骨性关节炎进行实验治疗研究，借以对其临床治疗进一步加以研究探讨，为临床早期治疗OA提供充足的实验依据。材料与方法：选择健康成年新西兰兔20只，由中国人民解放军白求恩国际和平医院实验动物场提供，雌雄不限，体重2．2．2．8kg，平均体重2．54-1-0．43kg。编号。采用膝骨性关节炎诱发模型，将兔膝关节伸直位石膏管型固定，膝关节制动6周，即制

2、成膝骨性关节炎模型。成功复制膝骨性关节炎模型后，手术暴露出兔股骨髁部退变区，用磨钻左右各钻出一个直径5ram的圆形关节软骨全层缺损区，深度约3ram，软骨下骨板被完全破坏；左股骨髁部关节软骨退变区为I组(移植细胞组)，左右两孔都填充含同种异体软骨细胞的纤维蛋白凝胶块；右股骨髁部关节软骨退变区为II组(对照组)，左右两孔都填充不含同种异体软骨细胞的纤维蛋白凝胶块。术后所有动物不加外固定，术后1个月每天帮助兔膝关节屈曲活动两次，30分钟／次，其余时间任意活动。按术后观察时间，随机分成A(术后4周)、B(术后8周)、C(术后12周)、D(术后24周)共4组，每组5只。于术后4周、8周、】2周、24

3、周分别处死，暴露膝关节，进行膝关节大体观中文摘要察，切取双侧股骨髁部，固定、HE染色、天狼猩红染色及免疫组织化学染色，光镜下观察各组动物标本病理改变，对膝关节修复软骨组织进行组织学评分,zP．N定膝关节修复软骨组织厚度，所有数据采用SPSSIO．0统计软件包进行统计学检测，P

4、修复组织与周围的关节面几乎平齐，组织较厚，韧性较强，色泽更接近正常的软骨组织，界限清楚。术后12周，缺损处洞形凹陷消失，原凹陷处填充的修复组织与周围的关节面几乎平齐，关节面较光滑，修复组织较厚，色泽略白，韧性已经与周围的正常软骨组织的差别不大，按压时阻抗大，边缘模糊，界限不清。术后24周，修复组织与周围的关节面平齐，关节面光滑，修复组织较厚，色泽为正常软骨的蓝白色，韧性与正常软骨组织无差别，按压时阻抗大，修复组织与周围正常的软骨已完全一样，边缘已辨认不出。对照组：术后4、8周，缺损处的洞形凹陷依然存在，软骨损伤部位未填平，软骨损伤部位的修复组织为纤维组织覆盖，呈透明的片状物，色白，与周围分界

5、清楚，较薄且柔软，按压无阻抗，与周围软骨组织未愈合。术后12±查塑墨一———————————————————————————————●———————————————一。周，缺损区能明显辨认出来，色白，为纤维组织修复，阻抗很小，与周围软骨组织未愈合，表面不平整、不光滑，呈瘢痕样改变。术后24周，缺损区仍能辨认出来，缺损边缘清楚，有凹陷或蘑菇状隆起，关节面粗糙，不光滑，呈瘢痕样组织外观，阻抗小，与周围软骨组织未愈合。2膝关节软骨修复组织学评分结果实验组与对照组：术后4周、8周、12周、24周，差值均数分别为3．0、2．8、2．6、2．8，差值的标准差分别为1．38、1．22、1．19、112，将

6、各组评分结果进行统计学处理，数据符合正态性分布且方差齐，应用配对设计差值均数的t检验，各时期实验组得分均优于对照组(P<0．01)。3膝关节软骨修复组织厚度测定(RT／CATD×100％)结果实验组与对照组：术后4周、8周、12周、24周，差值均数分别为32．6、29．5、27．1、33．9，差值的标准差分别为11．04、4．82、7．70、5．68，将各组评分结果进行统计学处理，数据符合正态性分布且方差齐，应用配对设计差值均数的t检验，各时期实验组得分均优于对照组(P<0．01)。4膝关节软骨修复组织免疫组织化学鉴定结果实验组在术后4周、8周、12周、24周各时间点，缺损处的修复组织均可见

7、大量II型胶原阳性染色的软骨细胞，胞浆被染成棕黄色，随着时间的延长，软骨基质中II型胶原阳性染色范围明显增加。对照组在术后4周、8周、12周、24周各时间点，缺损处的修复组织均未见II中文摘要型胶原阳性染色的软骨细胞。结论：透过将兔膝关节l枣囊位嚣囊管型鄹定，膝关节制动6周，见兔膝关节殿骨髁郏负菱处的软骨退变，退变的关节软骨表瑟不光滑，缺乏光泽，颜色浊是，嚣在其他区域，表现为正常的表露平滑光洁。瘸理改变包括表