人源白细胞介素21增强CIK细胞抗白血病作用及其机制的研究

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1、分类号：l巧513密级：学位类别：科学学位团专业学位口◇学校代码：1062学号：2010602888学科门类：医学天蚌酱科矢母Tl矗NJIN黼EOIeAl．UNlV￡RSI秆硕士学位论文MASTER’SDISSERTATIoN论文题目：人源白细胞介素21增强CIK细胞抗白血病作用及其机制的研究TITLE：MultiplecytotoxicfactorsinvolvedinIL一21enhancedantitumorfunctionofCIKcellssignaledthroughSTAT-3andSTAT5bpathways．一级学科：临床医学二级学科：内科学血液病论文作者：Sa

2、jinRajbhandary指导教师：赵明峰导师组成员：天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名学位论文版权使用授权书萨弓月钼本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以

3、供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密氏才。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者导师签哆年弓月么日7乡年易月易目天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：研究白细胞介素21(IL一21)对外周血来源CIK细胞抗白血病的作用及其作用机制。方法：采集分离正常人的外周血单个核细胞，加用细胞因子诱导培养CIK细胞，在IL．21作用下，MTT法检测CIK细胞的增殖能力及杀伤白血病细胞系K562细胞作用；流式直接免疫标记法检测CIK细胞表面IL．21受体(IL．21R)的表达；半定量RT-PCR法检测CIK

4、细胞IFN．Y、TNF．Q、TNF—B、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、FasL和NKG2DmRNA的表达；流式直接免疫标记法检测CIK细胞表面、perforin，FasL、NKG2D及细胞内TNF．13的表达；酶联免疫法检测培养上清中IFN．Y、TNF．Q的表达；免疫沉淀和Westem—blot的方法检测JAK—STAT细胞信号途径的变化。结果：在IL．21作用下，培养14天时，(1)细胞数量的扩增无明显变化。(2)CIK细胞对K562细胞的杀伤作用与未加细胞因子组相比明显提高，但随着时间的延长杀伤作用逐渐减弱。(3)CIK细胞表面IL．21R的表达明显增加约2倍。(4)CIK细胞

5、IFN．YmRNA的表达由(O．5103±0．2358)升至(O．7705±0．2493)穿孔素mRNA的表达量由(0．7592±0．1457)升至(O．9831±0．1265)，颗粒酶BmRNA的表达量由(0．4768±0．1589)升至(0．7319±O．1639)，FasLmRNA的表达量由(0．4608±0．2842)升至(0．7381±0．2568)，TNF．BmRNA的表达量为(0．5993±0．1865)，与对照mRNA的表达(0．5688±0．1849)差别不大，NKG2DmRNA的表达为(0．6321±0．1586)，与对照mRNA的表达(0．6042±O．12

6、68)差别不大。(5)培养上清中IFN．y和TNFQ的表达(6)CIK细胞表面FasL的表达为(0．19％)，与未加IL．21组(0．09％)相比明显增加，perforin，NKG2D的表达和细胞内TNF．13的表达无明显差异。(7)Westem-blot结果显示STATl，STAT3和STAT5信号途径的活化对CIK细胞具有重要的作用。结论：人源IL．21可增强外周血来源CIK细胞抗白血病作用，此作用是通过增加其受体的表达，增加穿孔素、颗粒酶B、FasL和IFN．y的表达而实现的，而且JAK．STAT细胞信号途径也参与了此种作用。提示IL．2l在增强白血病免疫治疗中具有潜在的临

7、床应用前景。关键词：人源白细胞介素21CIK细胞抗白血病作用作用机制天津医科大学硕士学位论文AbstractBackground：AdoptivetransferofactivatedTandNKcellshashadsignificantclinicalbenefitsincertaintumormodels．Cytokineinducedkiller(CIK)cellsareagroupofcellsthatpossessbothTandNKcelllikerecogniti