cik细胞的作用机制和研究现状

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1、CIK细胞治疗肿瘤的作用机制和发展现状姓名：吴建军摘要：CIK细胞足细胞因子诱导的汆伤细胞，它能够同吋表达CD3和CD56M种膜蛋白分子，［1］既具有T淋巴细胞强人的汆伤活性，也具有0然汆伤细胞杀伤时的非MHC限制性。与其他过继性免疫治疗细胞相比，CIK细胞具有增殖速度快、汆瘤活性高、汆瘤谱广、副作用小、对正常骨髓造血的影响轻微等优点，被汄为是新一代肿瘤过继免疫治疗的首选方案。关键词：CIK细胞向然杀伤细胞外周血中个核细胞（PBMC）多重耐药肿瘤细胞非MHC限制性过继细胞免疫治疗恶性肿瘤是危害人类健康的最严重的疾病之一，K•死亡率居各

2、种疾病的第2位，并且在我国仍呈现出上升趋势。随着肿瘤对人类生存健康的威胁日益严重，应对肿瘤的治疗模式也发生着日新月异的变化，芥种肿瘤治疗的新药物、新技术、新方法层出不穷，其中细胞生物治疗匕经初露锋芒，成为肿瘤生物治疗中重要的发展方A。继淋巴因子激活杀伤细胞（LAK）、浸润肿瘤淋巴细胞（TIL）及CD3平抗激活的杀伤细胞后，细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokineinducedkiller,CIK）的杀瘤作用H益受到重视。CIK细胞最早是1991年由美国斯坦福大学SchmidtWolf等［2］首次报道，他们发现在多种细胞因子（INF-Y

3、、CD3单抗、IL-la和IL-2）的作用下，外周血淋巴细胞可以被定向诱导并大量增殖成为肿瘤杀伤细胞。由于该种细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分了，因此具冇T淋巴细胞强大的抗瘤活性和然杀伤细胞的非MHC限制性杀瘤的优点。与其他过继性免疫治疗细胞相比，CIK细胞具有增殖速度快、汆瘤活性高、杀瘤谱广、副作用小、对正常骨髓造血影响轻微等优点。W此，CIK细胞被认为是抗肿瘤过继细胞免疫治疗的新希望。1CIK细胞治疗肿瘤的优点1.1CIK细胞增值活性髙通过INF-y、CD3单克隆抗体、IL-la和IL-2诱导外周血或脐血中的单个核细胞，生

4、成免疫活性更人的CIK细胞，经过2〜3周的扩增，CIK细胞的数量叫达20〜100倍左右，平均增加约25倍。经扩增后的达到近似疗效所需的细胞数较之LAK细胞约小1〜2个数量级，［M］而且在体内应用时完全无需联合使用重组人IL-2,避免了产生相关的不良反应。CIK细胞的高增殖活性解决了体外扩增效应细胞所获细胞数量少的难题。［5］CIK细胞杀瘤活性强CIK细胞屮主要以CD3*CD56‘T细胞为效应细胞。实验证明，0311)561细胞主要来源于单个核细胞中的T细胞(CD3*CD56),而非NK细胞(CD3TD56+)。因为同时具有NK细胞的表

5、型特征(CD56-)和T细胞的表型特征(CD3),［61所以CIK细胞乂被称为NK细胞样T淋巴细胞。:7:CD3‘CD56'细胞在未经培养的PBMC屮约占1%〜5%，培养后在绝对和相对数量上都可获得明显的增长(扩增30天，细胞数量扩大1000倍，群体屮比例扩大10倍)。［81较以前免疫效应的LAK细胞具冇更强大的杀瘤活性。Wolf等［11还发现，CIK细胞对化疗敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞杀伤活性无明显差别，对多重耐药肿瘤细胞同样敏感。对正常骨髓造血前体细胞毒性小Scheffold［9］通过CFU-GM形成实验检测CIK细胞对正常

6、骨髓造血前体细胞的影响，发现CIK细胞对K562细胞的杀伤强度高达3级，但对CFU-GM仅有不足1级的抑制。此1%［1°］也证实CIK细胞对正常髓系兑隆生成儿乎没冇影响，只是对红系的生成显示出轻微的抑制，这可能与CIK细胞自身分泌较高水平的INF-Y有关。2CIK细胞的培养脐血和外周血屮的单个核细胞可以用ficoll密度梯度离心法和羟乙基淀粉密度梯度离心法两种方法来获取。2.1ficoll密度梯度离心法以ficoll密度梯度离心方法分离人脐血单个核细胞，用生理盐水以1:1的比例稀释脐血并混匀，在离心管底部加入1/3的Hcoll分离液，

7、上面加入2/3的脐血稀释液，2000r/m,离心20分钟。取出离心管，用吸管吸出分离层屮的单个核细胞(0色雾状液体)。加入生理盐水洗涤三次，进行细胞计数，最后以初始细胞浓度为IX107ml接种于KPMI1640培养基屮。培养体系包括：RPMI1640培养基(Gibco公司)、10%胎牛血清(Hyclone)、IL-2(国产试剂)、IL-1a(PeproTech)>CD3单克隆抗体(Biolegend)、INF-y(PeproTcch),培养温度为37°C,C02浓度为5%。第一天在培养体系屮加入1000U/ml重组人IFN-y,孵育2

8、4h后加入50ug/mlCD3单克隆抗体、300U/ml重组人IL-2、100U/ml重组人IL-1a,继续孵育。随P每1〜3d更换培养液和重组人IL-2,约2周后即可得到CIK细胞产品。CIK细胞在培养的第22天左右增