小鼠心肌肥厚、心衰发展过程中心室肌细胞KV42、KCHIP2的表达变化及调节

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1、河北医科大学硕士学位论文小鼠心肌肥厚、心衰发展过程中心室肌细胞Kv4.2、KChIP2的表达变化及调节姓名：董芳申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：许彦芳20070301英文缩写IⅣSP+dp／dtAPDkEpiEndoSDSKvKChⅡ．2GAPDHCsACaN(EnglishAbbreviation)Leftaorticsystolicpressuredurationofactionpotentialtransientoutwardpotassiumcurrentsubepicardialsubendocardialsodiumdo

2、decylsulfatevoltage-gatedpotassiumchannelKvchannelinteractingprotein2glyccraldehyde-3-phodphatedehydrogenaseeyclosporinACalcineurin左室收缩压心室收缩、舒张速率动作电位时程瞬时外向钾电流心外膜下心内膜下十二烷基硫酸钠电压门控钾通道钾通道相互作用蛋白2甘油醛-3．磷酸脱氢酶环孢素A钙调神经磷酸酶中文摘要小鼠心肌肥厚、心衰发展过程中心室肌细胞Kv4．2、KChIP2的表达变化及调节摘要心肌肥厚、心衰是高血压、缺血性心

3、肌病、心瓣膜病等许多心血管疾病的常见合并症，心肌肥厚、心衰常常伴发心律失常，特别是心衰期心源性猝死(SCD)的发生率大大增加。近年来，尽管在心衰的药物治疗上已取得很大的进展，但心衰病人的死亡率仍然较高。故揭示心肌肥厚、心衰病理过程中心律失常产生的分子机制，寻找有效的防治措施，是心血管领域研究的重要课题。迄今，己在多种心肌肥厚、心衰实验动物模型观察到瞬时外向钾电流(k)的下调。k是心室肌细胞复极化早期的主要电流成分，它是由a亚单位(Kv4．2、Kv4’3)和且亚单位(KChrP2)构成的离子通道形成。k密度的减小可来自通道动力学的改变和／或通

4、道蛋白表达的减少，从而造成病理性动作电位(APD)延长。动作电位延长使心脏易发生早后除极产生触发活动及复极的离散度增大是心衰心律失常产生的重要原因。我们前期的实验表明，尽管心肌代偿性肥厚与心衰阶段均有小鼠乳头肌动作电位的延长，但两个阶段延长存在不同形式，前者以早期复极延迟为主，后者不仅有早期、而且存在晚期复极的延迟。提示心肌肥厚、心衰发展过程中电生理改变有随时间而变化的特征，而此种电生理进行性改变是否也伴有相应Ito离子通道的表达变化目前尚不清楚。中‘文摘要本实验拟在已建立的小鼠心肌肥厚、心衰模型上，观察不同病理发展阶段小鼠心室肌内膜下(s

5、ubEndocardial，End0)、外膜下(subepicardiM，Epi)心肌细胞k通道蛋白Kv4．2、KChIP2表达随时间变化的特点，并通过应用calcincurin(CaN)的特异性抑制剂环孢素A(CsA)，探讨其病理性改变可能的细胞内信号传导通路，从分子生物学角度为心肌肥厚、心衰的电生理重构及机制提供实验依据。～、心肌肥厚和心衰不同时期小鼠左心室游离壁内、外膜下心肌细胞Kv4．2、KChIP2的表达变化目的：观察在压力超负荷性心肌肥厚和心衰发展过程中，小鼠左心室游离壁内膜、外膜下心肌细胞Kv4．2、KChIP2蛋白在不同时间

6、点的表达变化情况。方法：(1)动物模型制各：将小鼠深麻醉后开胸，暴露主动脉弓，部分分离：用外径0．4mm针头与主动脉弓平行结扎，抽出针头，使主动脉弓狭窄65％-70％。术后左心室后负荷增加，血液流出受阻，造成压力超负荷性心肌肥厚和心衰的动物模型；观察动物的一般状况并测定心指数和血流动力学各参数(LVSP、4-dp／dt)。(2)用酶消化的方法急性分离小鼠左心室外膜、内膜心肌细胞，采用细胞间接免疫荧光技术，通过激光共聚焦显微镜观察Kv4．2、KChlP2在心内膜、心外膜下心肌细胞上的分布。(3)分别于术后2周、5周、13周提取左心室游离壁内膜

7、、外膜下心肌细胞膜蛋白，采用Westernblot技术检测Kv4．2、KChlP2的表达量，并用GAPDH来标准化上样蛋自量。手术结扎(Band)组与同时期假手术(Sham)组对照进行比较。结果：(1)小鼠主动脉弓不完全狭窄术后，2．7周心质中文摘要量指数和血流动力学各参数呈进行性上升，该时期为代偿性心肌肥厚阶段；8．13周LVSP、±dp／dt呈下降趋势，该时期为失代偿性心力衰竭阶段。(2)细胞免疫荧光观察显示：Kv4．2和KChIP2在内、外膜下心肌细胞上均有表达，且心外膜下心肌细胞Kv4．2荧光强度较内膜高，KChIP2在内、外膜上荧

8、光强度较一致。(3)同时期Sham组内膜、外膜下心肌细胞Kv4．2表达量存在明显差异(P<0．01)，心外膜下细胞表达高于心内膜(夕}膜／内膜--1．82)，而不同时间点(2周、