垂柳叶黄酮类化合物的分离、定量与生理活性研究

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1、吉林农业大学硕士学位论文垂柳叶黄酮类化合物的分离、定量与生理活性研究姓名：刘可越申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：郑毅男20030601吉林农业大学硕士学位论文垂柳中黄酮类化合物的分离、定量与生理活性研究摘要本文以开发利用垂柳资源，探明垂柳中黄酮类化合物的生理活性为主要目的，对垂柳叶黄酮类化学成分进行提取分离，并对其抗动脉硬化和降脂减肥药理活性进行研究。初步摸索了垂柳叶中总黄酮最佳提取工艺，为工业化生产提供相应的工艺参数。对垂柳叶中黄酮类化合物的不同季节含量变化的测定，以确定利用黄酮类化合物的垂柳叶的最佳采收期，为开发利用垂柳这一药用植物资源及开发新药提

2、供科学依据。一、垂柳叶总黄酮的提取工艺的研究：以总黄酮浸出量为指标，通过对微波萃取法和索氏提取法进行比较，并对提取次数和提取时间进行考察，最终确定以20％乙醇微波萃取3次，每次8分钟，恶黄酮浸出率高，为最佳提取工艺。二、垂柳叶中黄酮类成分单体化合物的分离鉴定：垂柳叶经乙醇(20％)微波萃取后回收溶剂，得浓缩液石油醚脱脂后过大孔树脂柱，用3o％，5o％，7o％乙醇梯度洗脱分得三部分AC30％)、B{50％)、C(7o％)，各部分浸膏经氯仿、乙酸乙酯、正丁醇系统溶剂萃取后，得三组正丁醇浸膏a(3o％)、b(5o％)、C(70％)，a用适量甲醇溶解，上清液经Seph

3、adexLH一20柱层析技术，以30％，5o％，70％的甲醇洗脱，5o％甲醇洗脱部分再经聚酰胺柱以3o％甲醇洗脱，获得单体化合物I。浸膏b、C用适量甲醇溶解，上清液经SephadexLH一20柱以甲醇洗脱即可获得两种单体化合物Il和111。采用理化分析、薄层检测，质谱、核磁共振等现代波谱手段、鉴定出3种单体化合物，即化合物l(木犀草素一7一。一D—D一吡喃葡萄糖苷)、I】(木犀草素)、lIJ(柯伊利素)。化合物IJl为首次在垂柳中发现。吉林农业大学硕士学位论文垂柳中黄酮类化台物的分离、定量与生理活性研究三、垂柳叶中黄酮类化合物生理活性研究：1、降脂活性的研究首

4、次时分离得到的单体化合物进行降脂活性的研究。在制备好的脂肪细胞中同时加入NE(去甲肾上腺素)和柳叶提取物，观察游离脂肪酸的生成量，以测定其对脂肪细胞的分解活性。结果表明：三种化合物均可不同程度的增益NE诱导脂肪细胞分解活性，并且化合物l作用最为显著；在NE为O．05¨g／ml水平时，化合物I在3oug／m1即可表现出促进NE诱导脂肪细胞分解活性，并随浓度增加而活性增强。2、抑制花生四烯酸代谢物活性的研究利用放射自显影的方法，对化合物lI、Ill进行了抑制花生四烯酸代谢途径的研究，测试结果表明：化合物ll、I儿可选择性的抑制花生四烯酸代谢产物12一HETE的生成

5、量，提示这两种化合物可能具有防治动脉硬化和过敏症及抑制癌细胞的转移的作用。四、不同季节垂柳中黄酮类成分的定量研究1、垂柳叶中总黄酮含量的测定利用比色法对不同季节的垂柳叶片及枝、絮中总黄酮含量进行测定，结果表明：5月12日垂柳叶总黄酮含量最高，可达到5．774％，到5月27日仅i5天含量迅速下降至2．956％，直至7月12日趋势渐缓，到7月27日含量最低1．876％，8月12日有所提升，接着下降幅度很小，基本持平，直到落叶2．675％。同时期的柳枝和柳絮中总黄酮含量均不高，柳絮中最低，只有O．261％。2、不同季节垂柳中木犀草素一7—0一D—D-吡喃葡萄糖苷定量

6、研究利用RP—HPLC法对不同生长期的垂柳叶片及枝，絮中的木犀草素一一7一O一0一D一吡喃葡萄糖苷进行定量方法的研究和含量测定。结果表明：吉林农业大学硕士学位论文垂柳中黄酮要化合物的舟离、定量与生理活性研究1)以甲醇一水一醋酸(57．5：42．5：0．5)为流动相，流速0．8ml／min，柱温30C为洗脱条件进行定量研究，方法准确稳定，重现性好。2)5月12日垂柳叶中木犀草素一7—0一D—D-吡喃葡萄糖苷含量最高，可达到o．721％，其后趋势同总黄酮含量变化一致，到5月27日下降至o．364％，到7月27日含量最低，落叶0．169％。3)同时期的柳枝和柳絮中木

7、犀草素一7一O—p—D一吡喃葡萄糖苷含量均不高，柳絮中最低，仅0．083％。从而可确定若要获得垂柳叶中黄酮类化合物的最佳采收期东北地区应在5月份刚出叶时，也可考虑采集落叶，其中总黄酮和木犀草素一7—0一D—D一吡喃葡萄糖苷含量仍占叶片干重的2．675％和0．173％，有一定的应用价值，既不破坏绿化，又可保持生态可持续发展。本实验对垂柳叶黄酮类化合物进行了分离、定量和活性研究，发现垂柳叶中黄酮类化合物含量丰富，并且含有抗血栓、抗动脉硬化和促进脂肪分解的活性成分。鉴于我国垂柳资源丰富，原料易获得，应当充分利用其资源优势，从化学成分和药理作用上对其深入研究，对其中的

8、黄酮类化合物进行提取精制和体内试验，以