五味子乙素对环孢素A致肾毒性的保护作用和相关机制的研究

《五味子乙素对环孢素A致肾毒性的保护作用和相关机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中山大学硕士学位论文五味子乙素对环孢素A致肾毒性的保护作用及相关机制的研究姓名：王燕申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：黄芝瑛20100602中山大学硕士论文五味子乙素对环孢素A致肾毒性的保护作用及相关机制的研究五昧子乙素对环孢素A致肾毒性的保护作用及相关机制的研究专业：药理学硕士研究生：王燕导师：黄芝瑛研究员摘要临床上，器官移植病人为防止术后排斥反应需长期服用免疫抑制剂。环孢素A(CsA)是一种从土壤真菌中提取的活性代谢产物，在体内通过抑制钙调神经磷酸酶的活性起到免疫抑制的作用，因其作用强、选择性高、价格便宜，目前已广泛应用于

2、实质器官移植的抗排斥反应，以及一些免疫性疾病如各种难治性肾病综合症的治疗。但长期服用环孢素A可产生严重的急性或慢性肾脏损伤，导致肾脏功能不全或衰竭，严重影响着移植病人的术后生存率。因此，如何减轻或消除环孢素A引起的肾毒性，现已成为临床以及基础研究领域关注的热点问题。五味子乙素(SchB)是从中国传统中药五味子中提取的一种木酯素类成分，也是五味子中含量最多、药理活性最强的单体之一。已有研究报道五味子乙素可增强肝细胞和心肌细胞的抗氧化能力，清除自由基，增强线粒体的功能和结构的完整性，减轻四氯化碳引起的肝细胞损伤及缺血再灌注引起的心肌细胞

3、损伤。五味子乙素对环孢素A引起的急慢性肾损伤是否具有干预保护作用，目前尚无文献报道。本研究拟从体外细胞水平和整体动物水平两个方面研究五味子乙素对环孢素A引起的肾脏损伤的影响，从氧化应激、细胞凋亡、内质网应激等多条途径探索其作用机制，为两者在临床的联合应用提供临床前实验依据，最终为临床上长期服用环孢素A所致的慢性肾损伤提供一种可行的解决方法。中山大学硕士论文五味子乙素对环孢素A致肾毒性的保护作用及相关机制的研究第一部分五昧子乙素对环孢素A致肾毒性保护作用的体外初步研究目的：利用HK-2细胞建立环孢素A致肾毒性的体外细胞模型，确定五味子

4、乙素对HK-2细胞保护作用的最佳剂量，初步探索不同剂量的五味子乙素对环孢素A所致的HK-2细胞损伤的影响，为下一步机制研究确定方向。方法：1．不同剂量(1．25、2．50、5．00、10．00、20．oo州)五味子乙素作用于HK-2细胞24h后，按试剂盒说明测定细胞内谷胱甘肽(GSH)的活性，确定五味子乙素的最佳给药剂量。2．根据方法l的实验结果，取对数生长期的HK-2细胞，随机分成6组：①溶剂对照组；@CsA模型组；⑨2．59MSchB+CsA组；④5．o州SchB+CsA组；⑤10．0pMSchB+CsA组；@200．OgMVE

5、+CsA阳性对照组。以上各组中CsA给药终浓度均为10．09M，溶剂对照组除外。3．MTT法检测各实验组HK-2细胞的存活率；按照试剂盒说明检测各组培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性；利用LeicaDMl4000B倒置显微镜、LeicaDFC500数码摄像机和LeicaQwinV3图像采集系统，观察各实验组HK-2细胞形态并进行图像采集。4．统计学方法：利用SPSSl3．0软件对数据进方差齐性检验、单因素方差分析(One．wayANOVA)或Kruskal．Wallis检验，组间比较用LSD法，以p<0．05作为判定统计学意义的

6、标准。结果1．各剂量组SchB作用于HK-2细胞24h后，2．5、5．O、10．O洲的浓度下HK-2细胞内GSH含量均高于其他剂量组，确定2．5、5．0、10．0¨M作为SchB在细胞实验中的给药剂量。．．2．10．Ol,tMCsA作用于HK-2细胞24h后，细胞存活率降低、培养上清液中LDH活性明显升高(P<0．01vsVHgroup)而同时给予2．5、5．0、10．01aMSchB及200．O洲VE后，可显著性增加HK-2细胞的存活率、降低上清液中LDH的活性(p

7、．0州CsA作用于HK-2细胞24h后，细胞肿胀，体积增大，且有较多漂浮ll中山大学硕士论文五味子乙素对环孢素A致肾毒件的保护作用及相关机制的研究的细胞及细胞碎片，细胞排列不紧密，无明显“铺路石”样的正常细胞形态。而同时给予SchB或VE后，细胞形态逐渐好转，上层死细胞及碎片逐渐减少，细胞排列较整齐，10．09MSchB+CsA组和VE+CsA阳性对照组细胞基本呈“铺路石”样的正常细胞形态。结论：环孢素A在10．09M的浓度下，对HK-2细胞具有明显毒性作用，可降低细胞存活率、诱导细胞死亡、以及改变细胞的正常形态。2．5、5．0、1

8、0．09M的五味子乙素可剂量依赖性地抑制CsA所致的细胞存活率下降和细胞损伤，保护细胞维持正常形态，对CsA所致的HK-2细胞毒性具有一定的保护作用。关键词：环孢素A，五味子乙素，保护作用，细胞毒性，HK．2细胞第二部分五味子乙素对环