α黑素细胞刺激素对谷氨酸诱导的视网膜兴奋性毒性的保护作用

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1、分类号：R77密级：学位类别：科学学位口专业学位团◎学校代码：1062学号：2010602602学科门类：医学又洱酱科矢萼TlANJlNMEDICALUHlVERSITY硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：仅．黑素细胞刺激素对谷氨酸诱导的视网膜兴奋性毒性的保护作用TITLEProtectiveeffectsof仅．melanocytestimulatinghormoneonglutamate—inducedretinalexcitotoxicity一级学科：临床医学二级学科：眼科学论文作者：刘冕指导教师：李筱荣教授导师组成员：张琰研究员天津医科大学研究生院二。一

2、三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：自昱L日期：∞J；年歹月27日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据

3、库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密团。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：童：l立日期：z。l弓年岁月27日导师签纠目期：zof5年j月)7日(‰气天津医科大学硕士学位论文中文摘要背景当今世界的主要致盲性眼病包括青光眼和糖尿病视网膜病变等眼部疾病。青光眼所致的持续性高眼压和糖尿病视网膜病变的血管损伤，均可使视网膜处于缺血状态，进而使谷氨酸在视网膜中的浓度增高，而过多的谷氨酸可造成视网膜兴奋性毒性。由此可见，谷氨酸诱导的视网膜兴奋性毒性是青光眼和糖尿病视网膜病变等致盲性眼病的共同病理状态。文献报道，a一黑素细胞刺激素(0【．MSH)可拮抗谷氨酸兴奋性毒性而

4、导致的脑部海马神经元凋亡和胶质细胞反应性增生。目的建立鸡胚视网膜组织块培养体系，并在国内首次利用该培养体系研究0【．MSH对谷氨酸引起的视网膜兴奋性毒性的保护作用。方法用胚胎第9天(E9)的鸡视网膜建立组织块培养体系。分别收集体外培养第3、5、7天的视网膜组织块及第12、14、16天(E12、E14、E16)的鸡胚视网膜各3块进行常规苏木精一伊红染色，观察各标本的视网膜形态及组织结构，并用实时PCR法分别检测不同培养时间点视网膜组织块中c【．MSH受体(MCRs)表达量的动态变化。然后将视网膜组织块分为谷氨酸刺激组、仅．MSH+谷氨酸刺激组以及正常培养组，分别用谷氨酸及Q—MSH+谷氨酸

5、处理48h，用TUNEL染色法检测各组视网膜组织块中细胞凋亡情况并进行定量分析；实时PCR法检测各组视网膜组织块中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果1．培养3、5、7d视网膜组织块中各层组织结构与E12、E14和E16的视网膜组织结构相同。2．MClRmRNA在E9、E12、E14和E16鸡视网膜中的表达量明显低于出生后1d，差异均有统计学意义(尸=0．001)；而MC5RmRNA在E9表达量明显低于E12及E14(均P=0．000)，但此后从E14至Pl则逐渐降低；而MClRmRNA和MC5RmRNA在培养不同时间的视网膜组织块中的表达量呈现同样的规律。3．TUNEL染色显示

6、谷氨酸刺激鸡胚视网膜组织48h后，视网膜内核层和节细胞层细胞大量凋亡，外核层亦有少量凋亡细胞，DAPI染色结果表明视网膜各层排列紊乱，但0【．MSH+谷氨酸刺激组视网膜结构比较规则。定量结果表明，谷氨酸刺激组鸡胚视网膜每张切片的平均凋亡细胞数量为(600．80-x24．19)个，仅．MSH+谷氨酸刺激组为(61．80-x15．77)个，正常对照组为(72．4+12．93)个，天津医科大学硕士学位论文各组凋亡细胞总体比较差异有统计学意义(F=1422．89，P=0．000)；Q．MSH+谷氨酸刺激组凋亡细胞数量明显少于谷氨酸刺激组，差异有统计学意义(尸=0．000)。4．谷氨酸刺激组视网膜

7、组织块中GFAPmRNA的相对表达量为2．234-0．06，0【一MSH+谷氨酸刺激组为1．14士0．15，正常对照组为1．054-0．04，处理组间总体差异有统计学意义(F=82．216，P=0．000)。谷氨酸刺激组GFAPmRNA的表达量是正常对照组的2．1倍，且差异有统计学意义(尸=0．000)。a．MSH+谷氨酸刺激组的GFAP表达较谷氨酸刺激组显著下调(尸=0．000)，但与正常对照组相比差异无统计学意义(P=0．553