VEGF基因对称和不对称siRNA的抑瘤效果

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1、南京大学学位论文独创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含任何其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南京大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一起工作的同志对本研究中所做的贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：嘞了q乏日期：2。『2’3，专l南京大学学位论文使用授权声明南京大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文

2、。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除了保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权南京大学研究生院办理。研究生签名：研瑚乏导师签名日期二。f立·弓·3f0IIlllllUIllUlllllllIlllllY2373721毕业论文题目：y塾g墅基因盟鏊塑丕盟整璺型△的控疽兹墨2009指导教师(姓名、职称)：玉建垩教授盆报送敦援中文摘要RNA干扰技术作为一种靶向性基因治疗手段，具有良好的临床应用前景，但也存在半衰期短、稳定性差等问题。因此，我们尝试

3、通过不对称结构改变、脂质胶束介导，与内皮抑素、依诺沙星联用来提高RNA干扰片段在体内的生物学活性及对肿瘤的抑制效果。本实验以重组人内皮抑素、聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG．PE)和二油基磷脂酰丝氨酸(DOPS)制备重组人内皮抑素PEG．PE．DOPS脂质胶束，用其介导靶向VEGF的siRNA或不对称siRNA(asiRNA)。用WesternBlot、CCK-8等实验方法体外检测其对蛋白表达和细胞活力的影响，并体内研究对H22荷瘤小鼠的抑瘤效应。结果表明，靶向VEGF基因的asiRNA能显著抑制VEGF基因的表达，脂

4、质胶束介导VEGF．asiRNA在体外和体内均具有有效的抗肿瘤活性，并延长了荷瘤小鼠生存期。另外，我们将asiRNA与依诺沙星、化疗药物联合使用，能够获得更高的抗肿瘤活性。对这些药物联合使用方式的进一步探索和优化将为临床给药方式的改进提供一种新的思路。关键词：siRNA，asiRNA，肿瘤，内皮抑素，依诺沙星，VEGF，RNA干扰SPECIALIZATION：￡塾垒￡磐!墨￡星坚鱼￡曼!星坠2i望金星!鱼堕gPOSTGRADUATE：JiaJiaGuoAbstractRNAinterferingasatargetingg

5、enetherapyiswithgoodprospectsforclinicalapplication，however，ithassomeproblemssuchasshorthalf-life，poorstability．Therefore，wedesignedaseriesofasymmetricshorter-duplexsiRNAs(asiRNAs)targetingVEGFandcomparedtheefficacyofasiRNAswithconventionalsymmetricalsmallinterfe

6、ringRNA(siRNA)indown—regulatingVEGFgeneexpressionandinhibitingtheproliferationofMCF-7cellsinvitro．RNAelectrophoresisandothermethodswereusedtOscreenthedifferentformulationsoflipidmicelles．Westernblot，cellcountingandCCK-8assaywere．usedtostudytheinhibitoryeffectsofl

7、iposome—mediatedsiRNAandasiRNAinMCF-7cells．H22tutqlor-bearingmiceweredividedintodifferentgroupsrandomly．After14daysin缸avenousinjectionofliposome-mediatedsiRNAorasiRNA，inhibitionrateandsurvivalratewerecalculated．ResultsshowedthatVEGFgeneexpressionlevelsweresignifi

8、cantlydownregulatedwiththeasiRNA21／23targetingVEGFgeneinMCF-7cells．TheasiRNA21／23targetingVEGFgeneshowedastronginhibitoryeffectonthegrowthofmousesolidlivertunl