bFGF对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的作用及机制

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1、重庆医科大学硕士学位论文bFGF对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的作用及机制姓名：江和碧申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：李廷玉2003.5.20重庆医科大学硕士学位论文中文全称符号说明英文全称骨髓间充质干细胞Marrowstromalstemcelis英文缩写MSCs碱性成纤维生长因子BasicfibroblastgrowthfactorbFGF全反式维甲酸Alltrans—retinoicacid二甲亚砜DimethyIsulfoxide三羟基四甲基茴香醚gutylatedhydroxya

2、nisole流式细胞仪磷酸缓冲液胎牛血清F10WcytometerPhosphatebufferSOlutionFc!talboyilieserum神经特异烯醇化酶NeuronspecifiCenolase神经微丝Neurofilament微管相关蛋白2Microtubuleassociatedprotein2ATRADMSOBHAFCMPBSFBSNSENFMAP2神经特异核蛋白NeuronspecialnuclearproteinNeuN神经胶质纤维酸蛋白Glialfibrillaryacidpro

3、tein五羟色胺受体l。5-Hydroxytryptamine。。GFAP5一HT。。成纤维生长因子受体FibroblastgrowthfactorreceptorFGFR2bFGF对骨髓问充质干细胞向神经元样细胞分化的作用及机制—————，————一中文摘要目的对于神经系统疾病所致的神经功能障碍理想的治疗方～●I-_●-●●__-_-_●__‘-⋯法就是神经细胞移植，现代研究发现认为骨髓间充质干细胞(Marrowstromalstemcells，MSCs)是神经细胞移植理想的供体来源。为了探讨碱性成纤

4、维生长因子(BasiCfibroblastgrowthfactor，bFGF)对MSCs分化为神经元样细胞的作用及其机制，本课题利用bFGF与不同生长因子和化学诱导剂组合诱导MSCs向神经元转化，以期了解bFGF在MSCs转分化中的作用机制，为MSCs用于神经细胞移植提供重要基础。／方法选择以下不同条件，诱导Mscs向神经元转化：第1(组：不预诱导，接种细胞一天后加2％--甲基亚砜(Dimethylsulfoxide，DMSO)+200umo]／L三羟基四甲基茴香醚(Butylatedhydroxyan

5、isole，BHA)和不含血清的DMEM／F12；第2组：lOng／mlbFGF预诱导一天，再加2％DMSO+200umol／LBHA和不含血重庆医科大学硕士学位论文清的DMEM／F12；第3组：0．5umol／L全反式维甲酸(Alltrans—retinoJcacid，ATRA)+10ng／mlbFGF预处理一天，再用加2％DMSO+200urnol／LBHA和不含血清的DMEM／F12；第4组：10ng／mlbFGF预处理一天，再加不含血清的改良的神经细胞培养基(Modifiedneuronalme

6、dium，MNM)处理：观察分化过程中细胞形态、数目的变化，免疫细胞化学检测分化后细胞神经元烯醇化酶(Neuronspecificeno]ase，NSE)、微管相关蛋白2(Microtubuleassociatedprotein2，MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(G1ialfibrillaryacidprotein，GFAP)以及N一甲基(酰)一D一、]冬氨酸受体(NN)AR)和五羟色胺受体。(5-Hydroxytryptamine。)的表达情况，并计算转化率；观察FGFR的表达及诱导后不同时间点原癌基因

7、c—myc蛋白的表达情况。结果1．经各组条件诱导后，MSCs均能分化为具有典型神经元形态的细胞，并明显表达NSE、MAP。、NMDAR和5一HT。但不表达GFAP；2．各组诱导转化率相比较，第2和3组即经bFGF，ATf}A+bFGF预诱导组明显高于不预诱导的第l组，第四组的转化率最高，达95％以上；3．诱导后的神经元样细胞FGFR一3表达明显增强，FGFR一1无明显改变；4．诱导后的神经元样细胞4小重庆医科大学硕士学位论文时开始表达c—myc蛋白，持续表达至36小时。结论以DMSO和BHA为基础诱导剂

8、，bFGF预处理可明显提高MSCs向神经元样细胞的转化率达30％之多：首次发现浓度为10ng／ml的bFGF主要是通过FGFR一3作用于MSCs，基本上不通过FGFR一1：首次发现在MSCs向神经元样细胞分化中的过程中，c—myc可能发挥着促进MSCs转分化与凋亡双重作用。、一。。L，，。。一关键词骨髓间充质干细胞；转分化；FGFR；c—myc；重庆医科大学硕士学位论文THEEFFECT0FbFGFONMARROWSTROMALSTEMCE