香蕉凝集素基因双启动子表达

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1、维普资讯http://www.cqvip.com果树学报2008，25(3)：422～425JoumalofFruitScience香蕉凝集素基因双启动子表达张建斌，赵静，黎耀平，金志强，徐碧玉(中国热带农业科学院热带生物技术研究所．海口571101)摘要：为了获得香蕉果实特异表达的强启动子，利用PCR方法将2个凝集素(BanLec)基因启动子串联在一起，置换植物表达载体pBll21上的35S启动子，构建BanLec基因双启动子携带gus植物表达载体pBIL3，用基因枪转化香蕉叶片、根系和果实薄片，瞬时表达结果显示BanLec基因串连的双启动子依然表现为果实特异性表达，而且表达量明显高于Ban

2、Lec基因单启动子及35S启动子，证明该串连的双启动子是一个在香蕉果实中特异表达且表达量较高的强启动子关键词：香蕉；凝集素基因；双启动子：果实特异表达中图分类号：$668．4文献标识码：A文章编号：1009—9980(2008)03-422—04ActivitycharacterizationofabananalectingenedoublepromoterZHANGJian—bin，ZHAOJing，LIYao—ping，JINZhi—qiang，XUBi-yu(InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology，ChineseAcademyofTro

3、picdAgriculturalSciences，Haikou，Hainan571101China)Abstract：Inordertoacquireanenhancedpromoterexpressedspecificallyinbananafruit，adoubleBanLecgenepromoterwereconstructedbyPCRmethod．The35SpromoterintheexpressionvectorpBI121wassubstitutedwiththedoublepromotertOconstructanewplantexpressedvectorpBIL3，whi

4、chwasthenligatedwithgusgene．Bananaleaves，rootsandfruitsec—tionsweretransformedwiththisvector．Theresultindicatedthatthisdoublepromoterwasfruit—specificanditsexpressionwasstrongerthansingleBanLecgenepromoterand35Spromoter．Keywords：Banana；BanLecgene；Doublepromoter；Fruit—specificexpression香蕉果实是利用转基因方法生产

5、重组药用蛋异表达的启动子，其表达活性稍高于35S启动子}lJ】，白、肽或有价值的化合物的理想生物反应器}l1，研究转化番茄研究也证实为果实特异高效表达启动子，者们期望插入的抗原基因能够特异地在香蕉果实中已获国家发明专利授权(专利号：ZL2oo410092468．4)。表达，从而使香蕉果实变成I=1服疫苗。这就要求有在此基础上，我们构建了该启动子的串联表达载体，果实组织特异性启动子。已报道的香蕉转基因研究通过gus瞬时表达研究其活性，期望能够获得香蕉中用到的启动子有花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启果实特异表达的强启动子，为香蕉果实作为植物生动子【2-4]，玉米泛素蛋白启动子(Ubi)[5-63

6、。水稻肌动蛋物反应器，生产药用蛋白或者药用成分提供一个优白启动子(Actin)t7～。这些启动子均为组成型启动子。良的启动子。它们不能实现目的基因在特定组织、特定时间表达。1材料和方法因此克隆适宜于香蕉遗传转化的果实组织特异性启动子是把香蕉作为口服疫苗的基础。近年来国内外1．1材料和试剂研究者在香蕉中分离到了一些果实的特异表达的启材料香蕉(Musaspp．AAAgroup．CV．Brazilian)动子，如ACC氧化酶基因的启动子[9]和ACC合成酶果实采自热带作物生物技术研究所实验基地。基因的启动子}J01，但未见在转基因中应用的报道。作化学试剂购自华美公司。载体pBI121、pBIL2、者

7、于2005年克隆了香蕉凝集素基因(BanLecgene)大肠杆菌EscherichiacoliDH5et、农杆菌GV3103本启动子，通过基因枪法对香蕉根、叶、果实的瞬时表实验室保存。达进行研究，证明Lectin启动子是一个果实高效特1．2方法收稿日期：2007一l1—05接受日期：2008—03—20基金项目：国家自然科学基金项目(30370987)；江苏省应用基础项目(BJ200018)作者简