红花黄色素对鸡趾屈肌腱损伤修复影响的实验证实

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1、·丰l山大学硕上学位论文红花黄色素对鸡趾屈肌腱损伤修复影响的实验证实红花黄色素对鸡趾屈肌腱损伤修复影响的实验证实学科专业：人体解剖与组织胚胎学学位申请入：罗程导师姓名：雷万龙教授摘要目的：肌腱损伤是手外科学多发性外伤，肌腱修复术后常常形成限制性粘连，严重影响手部功能的恢复，迄今为止尚无一种完全行之有效的防治措施。病理学研究显示肌腱及其周围相关组织均参与此损伤修复过程：即所谓内源性愈合和外源性愈合。如何有效地促进内源性愈合和减少外源性愈合一直受到国内外学者的关注，并已经和一直在尝试通过不同方法防止或减轻肌腱粘连，但仍未获得理想的效果。研究证实肌腱损伤修复过程中炎症反应加重了愈合过程

2、中的粘连程度。局部一些重要成分包括成纤维细胞、腱细胞以及它们所表达的一些相关蛋白密切牵涉到肌腱损伤的愈合过程和愈合过程中粘连的形成。红花黄色素被证实具有良好的改善局部血液循环、促进代谢、减轻局部炎性反应和止痛等药理作用受到众多学者的关注【lI。为此，本实验研究借助Leghorn鸡屈趾肌腱损伤修复模型、体视学观察、生物力学检测、病灶区碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，BFGF)，和I型胶原蛋白免疫组化探察等方法，研究证实肌腱损伤修复过程中局部病理学变化及其变化规律；局部炎症反应、BFGF和I型胶原蛋白对肌腱损伤修复的影响；红花黄色素在病

3、灶区炎症反应、BFGF和I型胶原蛋白的表达以及肌腱愈合过程中的作用。以此探讨红花黄色素在肌腱损伤后修复过程中的临床作用及其作用机制。中山大学硕上学位论文红花黄色素对鸡趾屈肌腱损伤修复影响的实验证实方法和材料：1．实验对象：选用同批孵出、在相同自然条件下喂养的3月龄的健康雄性白色Leghorn鸡56只，体重1．1～1．3kg(平均1．23：L-0．068kg)。分别随机分为对照组(包括正常组和假手术组，每组4只)和实验组(包括损伤修复l周组、2周组、4周组、6周组，每组12只，其中6只为用药组和6只为非用药组)。假手术组双侧鸡爪第3趾切开皮肤后逐层进入暴露趾深屈肌腱，但不对肌腱做任

4、何处理，然后逐层缝合。实验组所有Leghom鸡制备双侧鸡爪第3趾趾深屈肌腱横断后修复模型，方法和标准见121。用药组在吻合口局部应用红花黄色素后缝合腱鞘和皮肤。2．实验方法(1)模型构建：对双侧鸡爪第3趾趾深屈肌腱手术横断，之后再行外科缝合，术后使用石膏固定使其呈拳击手套状，实验动物随后回笼饲养，并使其能够自由活动。术后3天以含土霉素鸡饲料喂养，旨在预防感染。(2)体视学和组织病理学检测：分别于术后l、2、4、6周进行取材，期问行体视学观察；包括大体观察鸡趾深屈肌腱吻合口肉芽组织增生情况、肌腱愈合情况和肌腱周围粘连的情况，并对肌腱与周围组织粘连进行评级，以评估其粘连程度，方法及标

5、准见【引。组织学探察；HE染色之后在光镜下观察肌腱细胞爬行、细胞形态、炎性细胞浸润、胶原纤维生成及排列情况。(3)生物力学检测：将不同修复时间组的样本(肌腱)由近端至止点从腱鞘内小心锐性游离出来，然后固定于生物力学检测仪上进行抗张力测试，详尽方法、技术和原理见【2l。(4)免疫组化检测：本实验主要采用免疫组织化学PAP方法；即将Rabbitanti-chickencollagen．I和Mouseanti．bFGF抗体在4℃孵育48—72小时；然后分别进行抗兔和抗小鼠IgG(I：100)室温孵育2小时；最后分别进行兔．PAP和小鼠．PAP(I：200)室温孵育2小时；DAB．H20

6、2显色。(5)数据收集和统计学处理肌腱粘连程度的评估按照汤锦波[21论文粘连分度法，而且对于所得数据专门使用MannWhitneyU检验(两组)和H检验(多组)。但组织化学(HE)和免疫组化染色的阳性结构则是借助于IPPSl5．0图像分析系统在光镜高倍视野(x400)II中山大学硕士学位论文红花黄色素对鸡趾屈肌腱损伤修复影响的实验证实下获得实验数据(用均数士标准差表示)，并对所获得数据使用SPSSl0．0forwindows统计软件包进行统计学处理，它们两组间比较使用t检验，以P<0．05作为具有统计学意义，多组间比较则使用方差分析ANOVA检验，P<0．05表明具有统计学差异。

7、实验结果：(1)病灶区组织病理学变化观察显示正常组肌腱完整光滑、腱鞘内可见淡黄色滑液、肌腱与腱周组织无粘连、肌腱滑动性良好。在假手术组呈现轻度的粘连，但易分离，而且肌腱滑动性能基本良好。实验组肉眼观察显示，在术后l周组病灶区肌腱愈合处及其周围组织存在明显的水肿、粘连、肉芽组织增生。上述变化在术后2周组虽然水肿稍有减轻，但肉芽组织增生加重，周围组织的粘连情况显示其形成于术后l周，并于损伤2周时加重。术后4—6周，病灶区水肿减退、肉芽组织疤痕化、但粘连程度变化不明显。对所获得的实验数