甲硫氨酸脑啡肽对扁玉螺的免疫调节作用

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1、摘要脑啡肽是内源性阿片肽家族中的重要成员之一。它在生物进化过程中属于一类古老而又保守的神经肽物质，在生物体内作为神经调节递质，发挥着重要的免疫调节作用。研究发现，在贝类等低等动物体内亦存在脑啡肽等阿片肽系统，并且发挥着与高等动物中阿片肽相似的免疫调节作用。本文采用免疫组织化学StreptAvidin．Biotincomplex(S．ABC)法对一种重要的脑啡肽——甲硫氨酸脑啡肽(methionine-enkephalin,M．ENK)在软体动物扁玉螺体内各器官组织中的分布进行了定位，同时运用流式细胞术研究了在体外条件下，不同浓度的M．ENK对扁玉

2、螺血细胞吞噬作用的影响，并运用生化测定方法研究了不同浓度的M．ENK对扁玉螺血淋巴部分免疫因子的影响。免疫组化定位结果表明，在扁玉螺的体表和内部大部分组织细胞中均有M．ENK阳性物质的分布，且分布规律有所不同。其分布规律为：外套膜的内上皮细胞呈现M．ENK强阳性反应，而外上皮细胞则呈现M．ENK弱阳性反应。消化道的食道、胃及肠道的黏膜上皮细胞均呈M．ENK阳性反应，其上皮细胞游离端均有阳性颗粒分布；食道腺中有较多量的阳性细胞和弱阳性的纤维；肝是M．ENK阳性细胞分布较多的器官，主要分布在肝小叶中腺细胞的边缘游离端。呼吸系统中的鳃丝细胞大都呈M．E

3、NK阳性或弱阳性反应，在鳃丝末梢的部分细胞游离端有M．ENK阳性物质分布。心脏和肾中的大部分细胞阳性反应均较弱或呈阴性，而血细胞则大都呈M．ENK阳性反应。在中枢神经中，脏神经节中的M．ENK阳性物质分布较多，且多呈颗粒状，主要分布在神经胞体附近；在脑侧神经节周围的被膜及神经结缔组织鞘膜上发现有较多的阳性细胞，阳性神经纤维亦较多：而在脑侧神经节、足神经节、口球神经节内部神经元M．ENK阳性反应均较弱或呈阴性反应。在生殖腺中，部分滤泡上皮细胞呈M．ENK阳性反应，在成熟的生殖腺中，卵细胞也具有一定程度的M．ENK阳性反应。M．ENK在扁玉螺体内大部

4、分器官中均有分布，且分布密度有所不同，可能与在各部位发挥的功能不同有关，同时也为研究其对扁玉螺的免疫调节作用提供了现实依据。在体外试验条件下，运用流式细胞术和生化测定方法研究结果表明，在M—ENK浓度分别为O、l、5、25pg／ml条件下：(1)、当M-ENK浓度为1．00gg／ml时，血细胞吞噬率明显高于对照组，而随着浓度的升高，血细胞吞噬率明显受到抑制；(2)、从不同浓度的M-ENK对扁玉螺血淋巴中几种自由基的影响情况可以看出：除血细胞H202和羟自由基含量变化不太明显外，其它几种自由基随M．ENK浓度的变化情况为，当M．ENK浓度为1．00

5、“g／rrd时，实验组血清中的H202含量、NO含量、羟由基含量、CAT活力和SOD活力以及血细胞中的NO含量与CAT活力均高于对照组；当M．ENK浓度为5．00J．tg／ml时，实验组中仅有血清中的羟自由基含量仍明显高于对照组，而血清和血细胞中的其他几种自由基含量或活力均低于对照组或与对照组相当：而随着M．ENK浓度的继续升高，当M．ENK浓度达到25．00I．,g／ml时，实验组中血淋巴中各种自由基含量或活力大小均已明显低于对照组；(3)、在1．00p咖1和5．00}tg／ml较低浓度的M．ENK条件下，血清和血细胞中非特异性酯酶(Nonsp

6、ecificEsterase，NSE)活力基本呈现下降趋势，而这种变化趋势在血细胞中尤为明显，而在血清中的变化趋势则比较缓和，当M．ENK浓度达到25．00rtg／n以时，血清和血细胞中的NSE活力均有所回升，血清中NSE活力又接近对照组，而血细胞NSE活力仍明显低于对照组；(4)、随着M．ENK浓度的升高，血清和血细胞中的甲硫氨酰氨基肽酶(MethionineAminopeptidase，MAP)活力逐渐下降，当M．ENK浓度达到5．OO“g／ml时，血细胞中MAP活力已检测不出来。以上结果表明：低浓度的M．ENK对扁玉螺的免疫防御体系起促进作

7、用，即产生正调节作用，而较高浓度M．ENK对扁玉螺的免疫防御体系起着抑制作用，即产生负调节作用；M．ENK在扁玉螺免疫防御体系中可能发挥着比较重要的作用，与M．DⅨ的合成和降解密切相关的脚在M—ENK参与免疫调节作用机制中可能发挥重要作用。关键词：甲硫氨酸脑啡肽；扁玉螺；免疫调节；免疫组化；流式细胞术2AbstractEnkephalinisthemostimportantmemberoftheendogenousopioidsystem．Asneuralregulationtransmitterintheorganismsandwhichbel

8、ongstoaclassofancientandconservativeneuropeptidesubstance，itplaysani