现代分析测试技术-分离

《现代分析测试技术-分离》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、2分离与纯化2.1色谱分离法n按固定相所处的状态分类：n柱层析：将固定相装填在金属或玻璃制成的管柱中，做成层析柱以进行分离的，为柱层析；n毛细管色谱：把固定相附着在毛细管内壁，做成色谱柱的，为毛细管色谱。n纸层析：利用滤纸作为固定相以进行层析分离的为纸层析。n薄层层析：把吸附剂粉未铺成薄层作为固定相以进行层析分离的为薄层层析。按色谱分离的原理分类n吸附色谱：固定相为吸附剂，利用它对被分离组分吸附能力强弱的差异来进行分离。气固色谱和液固色谱属于这一类。n分配色谱：是利用各个被分离组分在固定相和流动相两相问分配系

2、数的不同来进行分离的，气液层析和液液层析属于这一类。n离子交换色谱：以离子交换剂作固定相，利用各种组分的离子交换亲和力的差异来进行分离。n凝胶色谱：又称排阻色谱：用凝胶作固定相，利用凝胶对分子大小不同的组分所产生阻滞作用的差异未进行分离。吸附柱色谱K=Cs/CmD由吸附剂表面对液体中各组分吸附能力(K)不同，而按一定D顺序吸附，从而将各组分分开。固定相（吸附剂）流动相（洗脱剂）吸附剂n粒度均匀的细小颗粒n较大的表面积和一定的吸附能力n吸附剂与欲分离的试样和所用的洗脱剂不起化学反应，n不溶于洗脱剂中n常用的吸附

3、剂有n氧化铝n硅胶n聚酰胺氧化铝n氧化铝具有吸附能力强、分离能力强等优点。n中性氧化铝适用于醛、酮、醌、酯、内酯化合物及某些苷的分离n酸性氧化铝适用于酸性化合物，如酸性色素、某些氨基酸，以及对酸稳定的中性物质的分离n碱性氧化铝适用于分离碱性化合响如如生物碱、醇以及其它中性和碱性物质氧化铝的活化n活性和含水量密切有关n活性强弱用活度级I～V级来表示，活度I级吸附能力最强，V级最弱。n通过加热至不同温度，可以改变氧化铝的活性,n分离弱极性的组分选用吸附活性强一些的吸附剂，分离极性较强的组分，应选用活性弱的吸附剂硅

4、胶n硅胶具有微酸性n吸附能力较氧化铝稍弱n可用于分离酸性和中性物质，如有机酸、氨基酸、萜类、甾体等。硅胶的化学组成n硅氧烷不具吸附性n硅醇基能与极性化合物或不饱和化合物形成氢键，因而具有吸附性n其中活泼型硅醇基构成最强烈的吸附中心，游离型次之，束缚型又次之n表面空穴较小的硅胶吸附性能较强硅胶的活化n水与硅胶表面的羟基结合成水合硅醇：Si—0H.0H2，使其失去吸附性能n加热至100℃左右能可逆地除去这些水分，使硅胶活化n最佳的活化条件为：105～110℃，加热30minn如果加热至200℃以上，则硅胶逐渐失去

5、结构水，形成硅氧烷，吸附能力下降n加热至400℃以上，硅胶的表面积逐渐变小，以至于烧结。聚酰胺n由已内酰胺聚合而成，又称聚己内酰胺n聚酰胺分子内存在着很多的酰胺键，可与酚类、酸类、酮类，硝基化合物等形成氢键，因而对这些物质有吸附作用n酚类和酸类以其羟基或羧基与酰胺键的羰基形成氢键n芳香硝基化合物和醌类化合物是以硝基或醌基与酰胺键中游离胺基形成氢键聚酰胺吸附规律n能形成氢键基团较多的溶质，其吸附能力较大n对位、间位取代基团都能形成氢键时，吸附能力增大n邻位的使吸附能力减小n芳香核具有较多共轭双键时，吸附能力增大

6、n能形成分子内氢键者，吸附能力减小流动相及其选择n流动相的洗脱作用实质上是流动相分子与被分离的溶质分子竞争占据吸附剂表面活性中心的过程n使试样中吸附能力稍有差异的各种组分分离。就必须根据试样的性质，吸附剂的活性，选择适当极性的流动相n流动相极性较弱时，可使试样中弱极性的组分洗脱下来，在层析柱中移动较快，而与极性较强的组分分离。n强极性和中等极性的流动相适用于强极性和中等极性组分的分离柱色谱法分离乙酰二茂铁n原理n根据二茂铁、乙酰二茂铁和1，1¢•二乙酰基二茂铁对活性氧化铝吸附力的差异而进行的。n色谱柱分离二茂

7、铁及其衍生物时经溶剂展开呈现谱带，因二茂铁吸附力最弱，谱带位于色谱柱下端，呈黄色；中间谱带呈橙色为乙酰二茂铁；1，1¢•二乙酰基二茂铁吸附力量强，色谱带呈棕色，位于色谱柱上端。n用极性不同的溶剂可分别洗脱，从而达到分离纯化的目的。n实验方法n干法装柱：将粗产品溶于0.5mL二氯甲烷中，加入300mgIII级活性的氧化铝，振荡均匀得浆状物。在通风柜中，在干燥氮气流下除去溶剂至恒重，得到松散的颗粒状产物，精确称取1/2重量的颗粒状产物，用作柱色谱分离。n将1.5×30cm色谱柱洗净、干燥，柱底铺一层玻璃棉或脱脂棉

8、，再铺一层约5~8mm厚的砂，填平。称取5g级活性的中性氧化铝（60~80目）。通过漏斗将氧化铝装入柱管内，轻敲柱管，使之装填均匀。将精确称得的1/2重量的颗粒状氧化铝装入柱内，顶部盖一层约5mm厚的砂子，使氧化铝顶端和砂子上层保持水平。洗脱n洗脱液面不能低于最上层固体物质，到洗脱结束。n缓慢滴入己烷逐渐展开得到黄色、橙色分离的色谱带。黄色的二茂铁谱带首先从柱下流出，用已称重的锥形瓶收集洗脱溶液。n