月季再生体系与pBinETR1转化初探-硕士论

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1、中国农业大学硕士学位论文月季再生体系与pBinETR1转化初探姓名：郑玉梅申请学位级别：硕士专业：园林植物与观赏园艺指导教师：刘青林20040601摘要为创新抗衰老的切花月季新种质，本文研究了影响月季再生体系建立和pBinETRl转化月季的因素。主要结果如下：(1)影响月季愈伤组织诱导的因素有品种、生长素、外植体、GA、ABA、固化物等，其中品种和生长素是主要因素。‘萨蔓莎’愈伤组织诱导率最高，‘红衣主教’、‘阿班斯’、‘金斯莱克’和‘阿维兰’依次。同一品种的不同外植体诱导愈伤组织效果不同．叶柄形成的愈伤组织色泽和硬度较好，而且同一品种不同外植体有特定适宜的培养基。NAA效果优于

2、2,4一D，适宜的浓度为2mg／L-4mgrC。添加ABAO．2mg／L和GAI．0-2，0mg／L可改善愈伤组织的硬度和色泽。改用gelrite胶有利于愈伤组织的诱导。(2)影响月季愈伤组织分化的因素有品种、外植体及培养条件，而品种是最主要的因素。‘萨蔓莎’的茎段愈伤组织在MS+BA2．0mg／L+NAAl．orhgrc上有芽状体的分化；叶柄基部在】MS+KT0．5mg／L+NAA2．omg／1．生成的愈伤组织，加MS+TDZ0．05-0．1ing／t,液体培养基后有分化出叶状体a‘金斯莱克’的叶柄基部愈伤组织在MS+KTO．5mg／L+NAA2．Ome．，L分化出芽体以及小植

3、株。‘红衣主教’愈伤组织没有分化。适当的暗培养可生成乳黄色、松散的愈伤组织，有利于分化。(3)在农杆菌转化试验中，品种和抗生素浓度是主要的影响因索。而不同菌液稀释度、不同共培养时间和不同固化物对月季愈伤组织农杆菌转化的影响不大。‘萨蔓莎’的愈伤组织在选择培养上存活率高于‘金斯莱克’的存活率。Kan的适宜浓度为200-400m∥L，Car的浓度适宜为200·400mg／La可见，影响pBinETRl转化月季的主要因素是品种。‘萨蔓莎’、‘红衣主教’、‘阿班斯’、‘金斯莱克’和‘阿维兰’均能生成愈伤组织；但只有‘萨蔓莎’和‘金斯莱克’的愈伤组织有芽状体的形成，‘金斯莱克’得到了芽体和

4、再生植株。另外获得了‘萨蔓莎’和‘金斯莱克，的抗性愈伤组织。这些为我们以后的转基因月季工作提供了良好的基础。关键词；月季；pBinETRl；愈伤组织；诱导；分化：转化AbstractKeyfactorsinroseregenerationandtransformationbypBinETRlarestudiedfornewanti—senescencelose．Theresultsshewthat：(1)Cultivar,auxin，explant，GA，ABA，condensatearethefactorsaffectingrosecallusinduction．Cultiva

5、randauxinarethemainfactors．‘Samantha’isbestforcallusinduction．thenonebyoneis‘Kardinal’，‘Abans’，‘Jimthylanky’and‘Babylon’．Theresultsarenotthesameforinducingcallusbyusingthedifferentexplants．Thecallusfrompetioleisgood．Eachcultivarhasitsproperexplantandmediumforcallusinduction．NAAisbetterthan2,4

6、-D，theproperconcentrationis2mg／L-4mg／L．AddingABAorGAdon’taffecttheinductionratio，buttherigidityandcolorofcalluscanbeimproved，theproperconcentrationforABAisO．2m鲋andGAis1．0-2．0mg，Irespectively．Gelriteisbetterthanagarforcallusinduction．(2)TheDifferentiationoflosecallusisaffectedbycultivar,explan

7、tandculturalcondition，inwhichthecultivaristhemostimportantfactor．Onebud，likeorganisdifferentiatedfrom‘Samantha”scallusinMS+BA2．0mg／L+NAA1．Omg，L．Leaves-likeafedifferentiatedfrom‘Samantha’callusinMS+KTO．5mg／L+theNAA2．0mg／LwithliqulidmediumofMS+