抗人胃癌细胞AGS单克隆抗体的制备和初步鉴定

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1、黄翔华杭人胃癌细胞AGS单克隆抗体的制备和初步签定抗人胃癌细胞AGS单克隆抗体的制备和初步鉴定摘要本研究用人胃癌细胞AGS免疫Balb／c小鼠，采用杂交瘤技术制备了抗人胃癌细胞的单克隆抗体(McAb)，初步鉴定了杂交瘤和McAb的生物学特性，包括：杂交瘤的染色体、McAb的效价和亚类以及McAb的特异性。一人胃癌细胞AGS(抗原)的培养常规方法体外培养人胃癌细胞AGS。通过绘制生长曲线，研究了AGS细胞的增殖规律，结果表明：AGS细胞生长增殖的潜伏期为1．2d，对数生长期为2．5d，停滞期为5-8d。以DMSO为冷冻保护剂，对AGS

2、细胞进行冷冻复苏。以该方法冻存的细胞解冻后的贴壁率为96．31％。这说明该方法对AGS细胞进行冷冻是切实可行的。二抗人胃癌细胞AGS单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备、筛选和克隆1．制备用AGS细胞免疫5只雌性Balb／c小鼠，间隔3周免疫1次。双方阵法确定了间接ELISA法的最佳抗原包被浓度为2x105／皿，阳性血清最适工作稀释度为1：104。间接ELISA法检测抗体效价达到1：104的3d后，通过PEG4000使免疫B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合。融合3d后出现杂交瘤细胞，7．10d后观察到杂交瘤细胞克隆生长。经HAT培养基

3、选择培养后，细胞的融合率为51．04％。内蒙古大学硕士学位论文2．筛选间接ELISA法的结果显示：只有184孔的上清液重复3次检测的P／N均大于2．1，呈阳性。3．克隆用显微操作法挑出杂交瘤184的单个细胞并接种于96孔细胞培养板，将杂交瘤培养上清液按1：104稀释，间接ELISA法第一次检测后，有9个孔呈阳性。第二次检测后，仅有184孔杂交瘤(命名为184)分泌的抗体仍呈强阳性。．三抗人胃癌细胞AGS单克隆抗体杂交瘤细胞株和McAb的初步鉴定1．杂交瘤细胞染色体杂交瘤细胞染色体的平均数为92条，符合融合细胞染色体的特点。2．McA

4、b的效价间接ELISA法检测到杂交瘤184上清液中McAb的效价可达l：104。3．McAb的亚类Ig类及亚类的鉴定结果说明该McAb属于IgGl亚类。4．McAb的特异性免疫化学法和间接ELISA法的结果均提示：McAb184与宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株HepG和正常人胎肺细胞均呈阴性反应，即不存在明显的交叉反应；但它与胃癌细胞株AGS呈明显阳性反应，说明该McAb可能对人胃癌有一定的特异性。关键词：胃癌，单克隆抗体，制备，鉴定Ⅱ黄翔华抗人胃癌细胞AGS单克隆抗体的制备和初步签定PREPARATIONANDIDENTIFIC

5、ATIONNOFMONOCLONALANTIBODYAGAINSTHUMANGASTRICCANCERABSTRACTBal／cmicewereimmunizedwithhumangastriccancercelllineAGS．Theresearchpreparedthemonoclonalantibody(McAb)againsthumangastriccancercarcinomawiththelymphocyteshybridomatechniqueandidentifiedtheelementarypropertiesin

6、cluding：hybridomachromosomes，titersoftheMcAb，subclassoftheMcAbandspecificreaction．1．CultureofhumangastriccancercelllineAGScellswereculturedinvitrowiththegeneralmethods．Proliferation—promotingruleofAGScellswasstudiedbyprotractingthegrowtkcurve．AGScellswerecryo．preserved

7、withDMSOascryoprotectantsinmanualway．Afterfreeze·thawcellviabilitywas96．31％inAGScells．Theresultsindicatesthatthecryo—preservationwithDMSOascryoprotectantsinmanualwayisaneffectivewayforcryo—preservingAGScells．2．Hybridomapreparation，selectionandclone(1)Preparation：5femal

8、eBalb／cmicewereimmunizedonceeverythreeweekswithⅢ内蒙古大学硕士学位论文humangastriccancercelllineAGS．Concentrationoptimizationofc