nNOS基因在臂丛神经根撕脱伤脊髓表达的种属特异性和区域特异性

《nNOS基因在臂丛神经根撕脱伤脊髓表达的种属特异性和区域特异性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中山大学博七论文nNOS基因在臂丛神经根撕脱伤脊髓表达的种属特异性和区域特异性nNOS基因在臂丛神经根撕脱伤脊髓表达的种属特异性和区域特异性专业：人体解剖与组织胚胎学博士生：王家传导师：周丽华教授中文摘要研究背景臂丛神经根性撕脱是最严重的臂丛损伤，常见于交通事故及新生儿生产过程的牵拉伤。臂丛神经根性撕脱伤往往会造成损伤侧肌肉瘫痪和严重的感觉丧失，在治疗上属于世界难题，临床上很难治愈。目前国内外的治疗主要采用神经移位术和功能重建的方法，虽然能使患肢功能得到部分改善和恢复，但效果并不十分满意。实验表明，臂丛神经根性撕脱可以导致损伤脊髓节段前角

2、运动神经元细胞死亡，因此，目前的研究目标主要放在对脊髓运动神经元的保护机制的研究上。基于大鼠动物模型的大量研究结果显示，撕脱诱导的运动神经元死亡与一氧化氮合酶(nitricOXidesynthaseNOS)基因的表达，特别是损伤侧运动神经元表达的神经元型一氧化氮合酶(neuronnitricoxidesynthasenNOS)密切相关。但是，nNOS在运动神经元死亡中的作用还没有完全搞清楚。臂丛神经根性撕脱后，大约80％损伤脊髓节段前角运动神经元最终会死亡，而nNOS一氧化氮合酶抑制剂可以显著降低运动神经元的死亡。因此，可以认为，损伤脊髓

3、前角运动神经元表达nNOS一氧化氮合酶是神经元死亡的一个信号。大鼠，小鼠和金黄地鼠是研究神经退行性疾病常用的三种啮齿类动物．我们前期的病理学研究显示：同样的臂丛根性撕脱伤导致运动神经元死亡的程度和死亡形式在三种大鼠都有区别：但是还不清楚是什么原因导致的这种差别。鉴于大鼠损伤脊髓运动神经元中nNOS基因表达与死亡的密切关系，本研究中山大学博士论文nNOS基因在臂丛神经根撕脱伤脊髓表达的种属特异性和区域特异性拟在分子水平比较臂丛根性撕脱后三种啮齿类动物nNOS基因表达的情况，以期进一步阐明nNOS基因在运动神经元死亡机制中的作用。研究内容实验

4、一：nNOS基因在臂丛神经根撕脱伤脊髓表达的种属特异性目的我们前期组织学研究发现：臂丛根性撕脱伤导致运动神经元死亡的程度和死亡形式在大鼠、金黄地鼠，和小鼠都有区别；本实验进一步从分子水平研究这三种常用实验啮齿动物脊髓nNOS基因对臂丛根性撕脱伤的反应是否一致。方法建立雄性成年SD大鼠，金黄地鼠和BALb／C小鼠全臂丛神经根撕脱伤动物模型．在撕脱伤后3天和14天，截取整个损伤脊髓节段(C5-TI)的新鲜脊髓组织，RT-PCR，WesternBlot的方法比较nNOS基因在mRNA和蛋白质水平的表达情况。结果：臂丛神经根性撕脱后，三种鼠损伤C

5、5-TI节段脊髓组织nNOSmRNA的表达均下降，而且具有时间依存性。但三种鼠nNOSmRNA表达下降的幅度是不一样的，下降最多的是小鼠，其次是大鼠，金黄地鼠下降最少。三种动物C5-TI全节段脊髓nNOS蛋白表达水平存在很大差异，大鼠脊髓根性撕脱后3天和14天nNOS蛋白表达与正常组比较都是降低的，而在金黄地鼠和小鼠都是升高的。臂丛神经根性撕脱导致nNOS蛋白的表达随着时间的延长而降低。总体表现为大鼠最少，金黄地鼠其次，小鼠最多，且在撕脱后3天和14天这种趋势是一致的。实验二：nNOS基因表达在臂丛神经根撕脱伤脊髓区域的特异性目的：以往大

6、量nNOS免疫组化和NADPH-d组化研究显示：撕脱伤后脊髓前角运动神经元nNOS蛋白高表达，但是我们第～部分实验却发现：撕脱伤后创伤脊髓组织内nNOS基因表达却减少。本实验研究同一损伤节段伤中Ib大学博士论文nNOS基网在臂从神经根撅脱伤脊髓表达的种属特异性和区域特异性侧(撕脱伤)和健侧脊髓组织中nNOSmRNA和蛋白质表达水平的差异。方法建立雄性成年SD大鼠，金黄地鼠和BALb／C小鼠全臂丛神经根撕脱伤动物模型．在撕脱伤后3天和14天，分别截取损伤脊髓节段(C5-T1)伤侧、健侧的新鲜脊髓组织，RT-PCR，WesternBlot的方

7、法比较nNOS基因在mRNA和蛋白质水平的表达情况。结果在撕脱后3天，大鼠和金黄地鼠伤侧脊髓组织nNOSmRNA的表达略有下降，而小鼠伤侧nNOSmRNA的表达却明显升高。在撕脱后损伤14天，大鼠伤侧脊髓组织nNOSmRNA表达明显升高，而小鼠伤侧nNOSmRNA的表达则有所下降，金黄地鼠伤侧与健侧脊髓组织nNOSmRNA的表达差异不明显。撕脱后14天伤侧脊髓组织nNOS蛋白水平在大鼠和金黄地鼠明显升高，而在小鼠则明显降低。实验三：臂丛神经根撕脱伤nNOS基因在大鼠脊髓后角神经元和前角运动神经元表达的特异性目的本研究实验一、二的结果显示：

8、撕脱伤导致大鼠脊髓nNOS基因下调，但是伤侧脊髓组织nNOS基因则上调，推测健侧脊髓组织nNOS基因表达下调。大量前期实验又发现：正常脊髓后角存在nNOS阳性神经元，而前角运动神经元不表达nN