实验一蛋白质的等电点测定和沉淀反应

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1、实验一、蛋白质的等电点测定和沉淀反应一、目的1.了解蛋白质的两性解离性质2.学习测定蛋白质等电点的一种方法3.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识4.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义二、原理蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡：等电点:当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。四、操作步骤（一）酪蛋白等电点的测定（1）取同样规格的试管4支，加入各试剂，然后混匀。此时4个管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。（2）各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，加一管，摇匀一管。观察其

2、混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。（二）蛋白质的沉淀及变性1、蛋白质的盐析蛋白质的盐析:无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。盐溶:由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。于试管中加入蛋白质溶液5mL，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。此时析出沉淀为

3、清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。2、重金属离子沉淀蛋白质重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加3%硝酸银溶液1—2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？3、某些有机酸沉淀蛋白质取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加入1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。放置片刻倾出清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。4、有机溶剂沉淀蛋白质取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL95%乙醇。观察沉淀的生成（如果沉淀不明显，加点NaCl，混匀。5、乙醇引起的变性与沉

4、淀取3支试管，编号。依下表顺序加入试剂1.向各管内加水4ml，在2，3管内各加一滴甲基红2.第二管中用0.1mol／L醋酸溶液中和。第三管用0.05mol/L碳酸钠溶液中和，观察各管的颜色变化和沉淀生成3.每管再加0.1mol/L盐酸溶液数滴，观察沉淀的再溶解五、注意事项等电点测定的实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确。六、实验报告以表格形式总结实验结果，包括观察到的现象，分析评价实验结果。七、思考题1、什么是蛋白质的等电点？2、在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？