蛹虫草子囊孢子萌发及其后代群体培养性状观察

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1、菌物学报24（4）：525~532,2005Mycosystema蛹虫草子囊孢子萌发及其后代群体培养性状观察11*21梁月张国珍安沫平蔡祝南12（中国农业大学植物病理学系北京100094；河北省农业环境保护监测站石家庄050011）摘要：从野生和人工栽培的蛹虫草子实体共分离了6个子囊孢子群体，对子囊孢子形态、萌发过程、培养性状及子实体产生等进行了观察。结果表明，蛹虫草子囊孢子为线形、多细胞，169.78~364.57×1.72~2.04µm；每个子囊孢子有56~114个细胞，每个细胞大小为1.77~4.53×1.72~2.04µm。子囊孢子弹射后13h开始萌发，30h后开始形成分生孢子。多数

2、子囊孢子的每个细胞都能萌发，但少数子囊孢子的部分细胞不萌发。子囊孢子群体的培养性状表现多样性，以I型所占比列较大。野生群体的菌落颜色以杏橙色和淡柠檬黄色为主，而人工栽培的群体以橙铬色所占比例最大。不同个体的菌落生长速率有差异。野生群体产生扇形突变的比例高于人工栽培群体。在人工栽培的CM群体中出现了气生菌丝较多、白色、生长缓慢的个体。菌落为I型，橙铬色或杏橙色，生长速率正常，无突变的单子囊孢子菌株产生子实体的可能性较大，子实体产量较高，但大部分单子囊孢子菌株不能产生发育良好的子实体。关键词：孢子形态，菌落颜色，菌落生长速度，扇形突变，子实体产生中图分类号：Q939.96文献标识码：A文章编号：

3、1672-6472（2005）04-0525-0532蛹虫草Cordycepsmilitaris(L.)Link，无性世代为PaecilomycesmilitarisZ.Q.Liang，隶属子囊菌门、肉座菌目、麦角菌科、虫草属，是虫草属的模式种，为虫生药用真菌。由于其药用成分近似甚至某些成分高于冬虫夏草，被用作冬虫夏草的替代品。随着野生冬虫夏草资源的不断减少，对蛹虫草的需求量日益增加，蛹虫草在国内外倍受人们的关注。国外将冬虫夏草和蛹虫草作为功能食品开发而备受青睐，已有数十种产品投放市场（梁宗琦，2001）。有关蛹虫草的研究已有不少报道，但多集中在蛹虫草无性世代的生物学特性研究（冯志勇等，19

4、96；梁宗琦，2001；姚国洪等，2003）、人工栽培条件和技术（陈艳秋等，2002）、液体发酵培养（Mao&Zhong，2004）、药用成分（王刚等，2004；Rukachaisirikuletal.，2004；Won&Park，2005）等方面，对蛹虫草有性世代和遗传变异方面的研究鲜有报道（高新华等，2000；李美娜等，2003）。蛹虫草以子实体入药，而子实体是有性生殖的产物。在蛹虫草人工栽培过程中常出现菌种退化，子实体产生减少或不产生的现象。因此，子实体产生的数量和质量是生产中人们关注的问题。目前对蛹虫草的遗传、有性生殖过程和退化原因等还不清楚。本文从野生和人工栽培的蛹虫草子实体分离子

5、囊孢子，对其萌发、培养性状等有关特性进行了观察，旨在为进一步研究蛹虫草的有性生殖、遗传变异，以及选育高产优良菌株和提高人工栽培子实体的产量奠定基础。*通讯作者E-mail:zhanggzh@cau.edu.cn收原稿日期：2005-03-04，收修改稿日期：2005-05-18526菌物学报24卷1材料与方法1.1试验材料于2003年和2004年采自辽宁地区野生和北京地区人工栽培的新鲜蛹虫草子实体。1.2培养基子囊孢子分离和萌发使用1.6%水琼脂培养基，培养使用改良PDA培养基，子实体产生试验所用的接种体用改良PD液体培养基摇培，子实体形成使用大米培养基。1.3单子囊孢子的分离与培养将新鲜、

6、成熟的蛹虫草子实体悬于水琼脂培养基上方，使子囊孢子自然弹射其上。在体式解剖镜下挑取只有单个子囊孢子的水琼脂小块，置于改良PDA培养基上，23℃下光照培养箱中培养。观察其菌落颜色、形态、生长速率、有无突变等培养性状。1.4子囊孢子形态与萌发过程的观察将弹射有子囊孢子的水琼脂培养基平板在OlympusIX71倒置显微镜下进行显微观察并照相，用Olympus专业软件Image-ProPlus5.0测量子囊孢子大小。同时分别在光照和黑暗23℃条件下，每隔2h观察一次子囊孢子萌发情况，至60h结束。统计观察子囊孢子总数和部分细胞不萌发的子囊孢子个数。1.5单子囊孢子菌株产生子实体试验将单子囊孢子菌株在

7、改良PDA培养基上培养15天左右，刮取菌丝和分生孢子接种到30mL改良PD液体培养基中摇培3天。摇培后的菌液定量接种到瓶装的大米培养基上，每个菌株重复3次，在合适光照和温度下培养，观察子实体产生情况，称量其鲜重。2结果与分析2.1子囊孢子后代群体的分离分别从野生和人工栽培的蛹虫草子实体弹射的子囊孢子中，随机分离得到了大量的单子囊孢子。将来自同一个子实体的子囊孢子视为一个群体，冠以同样的字母进行编号，共得到6个