正交实验优化蛹虫草培养成分提高虫草菌素含量

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1、正交实验优化蛹虫草培养成分提高虫草菌素含量作者：施渺筱，舒星，肖洋，蒋滔　李祝【摘要】目的通过正交实验优化蛹虫草培养成分，提高虫草菌素含量。方法以蛹虫草的无性型Peacilomycesmilitaris08-03为材料，进行正交实验。结果通过正交实验优选出的最佳培养基成分为：蛋白胨2%、酵母膏3%、麦牙糖3%、蔗糖4%、KH2PO40.1%、NaNO30.1%、NH4Cl0.2%,140r/min，27℃，摇瓶发酵8d;虫草菌素含量为(0.98±0.08)mg/g。结论优化的培养基比用查氏液体培养基培养的虫草菌素产量[(6.5

2、1±0.22)mg/g]提高了近6.6倍。【关键词】虫草菌素;蛹虫草;培养基;发酵　　Abstract：ObjectiveTooptimizethemediaconditionsofCordycepsmilitarisbyorthogonallayouttoenhancecordycepinproduction.MethodsThestudyummediaconditionsforsubmergedfermetationofPeacilomycesmilitaris08-03toenhancecordycepincontent

3、.ResultsTheoptimumconditionsaltose,4%canesugar,0.1%KH2PO4,0.1%NaNO3and0.2%NH4Cl,140r/min,27℃,fermentationfor8days,thecordycepinproductionfromPeacilomycesmilitaris08-03myceliag/g.ConclusionThecordycepinproductionintheoptimummediaesmorethantheCzaped(0.98±0.08mg/g).　　K

4、eyilitaris;Cordycepin;CulturalMedia;Increasing　　虫草菌素(Cordycepin)即3'-脱氧腺苷(3'-Deoxyadenosine)，又称蛹虫草菌素，由Cunningham等于1951年从蛹虫草Cordycepsmilitaris(Linn)Link的培养滤液中分离得到。蛹虫草菌素是第1个从真菌中分离出来的核苷类抗生素[1，2]。　　虫草菌素具有多种生物学活性。虫草菌素能抑制枯草杆菌、链球菌、鼻疽杆菌、炭疽杆菌、猪出血性败血症杆菌及葡萄球菌等病原菌的生长，对石膏样小芽孢癣菌、羊

5、毛状小芽孢癣菌及须疮癣菌等皮肤致病性真菌亦有抑制作用。虫草菌素对鼠艾氏腹水癌、人鼻咽癌KB细胞、人表皮样疣和人宫颈癌Hela细胞等皆具有明显的拮抗抑制作用。虫草菌素可抑制一种脑炎病毒，对人体免疫缺陷病毒HIVI型的侵染及其反转录酶的活性亦有抑制作用。另外，虫草菌素对尖音库蚊Culexpipiens、埃及伊蚊Aedesaegypti和另一种伊蚊A.atropalpus的幼虫也有明显致死作用[2～5]。虫草菌素的多种生物学活性引起了药学界的重视，但野生的蛹虫草中虫草菌素的含量一般不高[6，7]。因此，提高发酵菌丝体中虫草菌素的含量

6、成为研究热点。　　1材料和方法　　1.1供试菌株蛹虫草Cordycepsmilitari无性型，蛹草拟青霉Paecilomycesmillitaris08-03菌株(以下简称08-03)，保存于安顺学院化学系。　　1.2试剂虫草菌素(cordycepin)购于美国Sigma公司。其他试剂均为分析纯。　　1.308-03菌丝体中虫草菌素含量的测定[8]精密称取08-03菌丝干粉0.2g，置于25ml具塞试管中，加入6倍量的20%乙醇，50℃水浴30min，稀释并定容至25ml，双层滤纸过滤，用HPLC进行测定。　　色谱柱：C18

7、(4.6mm×250mm，5μm);流动相：0.02mol/L乙酸铵∶甲醇(85∶15);流速0.7ml/L;紫外检测波长260nm;在此条件下，虫草菌素保留时间为6.66min。　　1.4碳源的选择以蛋白胨2%，MgSO4·7H2O0.05%，KH2PO40.1%为基础培养基，以葡萄糖、蔗糖、甘油、麦芽糖、可溶性淀粉分别为5种碳源加入，制备培养基，培养基装量为20%(所有实验均用此)，将08-03接入不同的培养基中，140r/min，27℃，摇瓶培养192h(8d)，对比葡萄糖、蔗糖、甘油、麦芽糖、可溶性淀粉分别为碳源时对虫

8、草菌素含量及生物量的影响。　　1.5氮源的选择以蔗糖2%，MgSO4·7H2O0.05%，KH2PO40.1%为基础培养基，对比蛋白胨、酵母膏、豆饼粉、花生粉、蚕蛹粉分别为氮源时对虫草菌素含量及生物量的影响。其中豆饼粉、花生粉、蚕蛹粉经煮沸水解20min，冷却置冰箱过夜后，取