果酒中叶绿素铜钠的测定分光光度法

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1、研究简报生命科学仪器2008第6卷/1月刊果酒中叶绿素铜钠的测定分光光度法孔鲁裔（国家农业标准化监测与研究中心　黑龙江）摘要研究各种操作条件对分光光度法测定果酒中叶绿素铜钠的影响,得到了较有价值的结论。关键词叶绿酸铜钠；果酒；分光光度法1前言铵，至500mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，于棕色试剂瓶中保存。叶绿酸铜钠是用有机溶剂从蚕沙或绿色植物的叶f）解吸液：0.1mol/L氢氧化钠:无水甲醇溶液=茎中提取的叶绿素，再经皂化、铜代所得到的墨绿色1:10（V/V）。粉末，是一种半天然色素。在医药、食品及日用工业g）叶绿素铜钠标准品：≥99.7%上有广

2、泛的用途，可在食品加工中作罐头青豆、苦瓜、h）标准储备溶液：精确称取按其纯度折算为蕨菜以及糖果、蜜饯、饮料、酒等的着色剂。大量食100%质量的叶绿素铜钠标准品0.0500g，于100mL用会造成人体重金属铜中毒、心血管等疾病。我国食棕色容量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，此溶品添加剂卫生标准（GB2760-96）中规定叶绿素铜钠液浓度为500μg/mL，需当天配置。盐在食品中最大使用量为0.5g/kg，有了规定的限量，2.1.2仪器设备没有定量的方法作正确的检测也就无法监控。为了确a）紫外可见分光光度计。保安全，建立一个高效、准确的测定叶绿素铜钠的方

3、b）砂芯漏斗G3。法是势在必行的。c）溶剂过滤器。本方法是目前对于果酒中叶绿素铜钠的检测最直2.2操作步骤接的方法。叶绿素铜钠的分析方法国外报道的有溶2.2.1标准曲线的制备与测定剂抽提法、氧化铝柱、聚酰胺薄层分析法等。但2.2.1.1标准工作溶液的配制是，柱法操作复杂、时间长，难以避免色素分解、精确移取500μg/mL标准溶液10mL至100mL烧褪色。因此，本方法立足于运用常规的化学检测方杯中，加入0.2mol/L的乙酸铵溶液30mL，用冰乙法，采用了聚酰胺吸附法经过系统改进，试验得到酸调pH至5～6。加入3.0g聚酰胺粉，充分搅拌2min，了快

4、速、简易、良好的效果。避光静置5min，用G3砂芯漏斗抽滤。再用约200mL2检测方法蒸馏水充分洗涤，弃去滤液。用75mL解吸液分三次解吸色素，每次倒入约25mL解吸液，浸泡2min，2.1试剂与仪器再摇匀2min，抽滤并用10mL解吸液洗净抽滤瓶中残2.1.1试剂与材料液。收集滤液，用解吸液定容至100mL，配制成浓度a）聚酰胺粉，80目～120目。为50μg/mL的标准溶液，此溶液临用时配制。b）无水甲醇、冰乙酸、氢氧化钠、乙酸铵，2.2.1.2标准系列的配制及测定均为分析纯。分别吸取标准工作液0mL、5.0mL、10.0mL、c）0.1mol/

5、L氢氧化钠溶液：称取0.400g氢氧化30.0mL、50.0mL，至50mL容量瓶中，用解吸液稀钠至100mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，于释至刻度，配制成浓度为0μg/mL、5μg/mL、10试剂瓶中保存。μg/mL、30μg/mL、50μg/mL的标准系列。以d）4mol/L氢氧化钠溶液：称取16.0g氢氧化0μg/mL溶液为空白，用分光光度计以1厘米比色钠，至100mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，杯于404nm波长下测定其吸光值。于试剂瓶中保存。2.2.2样品制备e）0.2mol/L乙酸铵缓冲液：称取7.708g乙酸将样品摇匀，准确称取

6、10.00g～20.00g样品至48研究简报生命科学仪器2008第6卷/1月刊100mL烧杯中,加入0.2mol/L的乙酸铵溶液30mL,在溶于醇和氯仿。在食品加工中做罐头青豆，苦瓜以55℃～60℃的水浴中加热3min～5min。用氢氧化钠及糖果、蜜饯、饮料、酒等的着色剂。溶液和冰乙酸调pH至5～6。预先称取3.0g聚酰铵粉3.2光谱扫描于小烧杯中，加蒸馏水调成浆状，加入样品中，充分对叶绿素铜钠标准品进行紫外光谱分析扫描测其搅拌。将样品溶液转移至G3砂芯漏斗中，抽滤，用最大吸收峰为404nm，如图1。约200mL蒸馏水充分洗涤，弃去滤液。用75mL解

7、吸3.3聚酰胺粉吸附叶绿素铜钠最佳pH值范围的选择液分三次解吸色素（同2.2.1.1），收集滤液，用解吸根据资料显示，聚酰胺粉在酸性条件下吸附性最液定容至50mL。好，而在试验中却发现叶绿素铜钠在酸性条件下，生2.2.3样品测定成叶绿酸沉淀。为了选择最佳pH值范围，我们选用取以上样品的制备液，以标准曲线的0μg/mLpH1、2、3、4、5、5.5、6、7、9.5的缓冲溶液各30mL，溶液为空白，用分光光度计以1厘米比色杯于404nm分别加入500μg/mL的叶绿素铜钠标准溶液10mL和波长下测定其吸光值。3.0g聚酰胺粉，经吸附后用100mL氢氧化钠

8、—甲醇解吸液解吸，目测情况如表1。2.3结果计算结果表明，pH5.0～6.0时无明显沉淀，吸附较样品中叶绿素