溶血磷脂酰胆碱的促动脉粥样硬化作用及其机制研究

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1、分类号：学校代码：１０１２６０８０１８密级：学号：２１２？４ｋ＾ＩＮＮＥＲＭＯＮＧＯＬＩＡＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＷ±＿像輪变ＤＯＣＴＯＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ溶血磷脂酰胆碱的促动脉粥样硬化作用及其机制研究ＳＴＵＤＹＯＮＴＨＥＭＥＣＨＡＮＩＳＭＯＦＡＴＨＥＲＯＧＥＮＩＣＥＦＦＥＣＴＳＢＹＬＹＳＯＰＨＯＳＰＨＡＴＩＤＬＹＣＨＯＬＩＮＥ学院：生命科学学院专业：生物化学与分子生物学研究方向：受体介导信号通路的调控机理

2、姓名：＾指导教师：阿拉坦高勒教授学校代码：10126学号：21208018分类号：编号：论文题目溶血磷脂酰胆碱的促动脉粥样硬化作用及其机制研究学院：生命科学学院专业：生物化学与分子生物学研究方向：受体介导信号通路的调控机理姓名：包良指导教师：阿拉坦高勒教授2018年12月08日原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下逬衧的岍Ｋ工作及取袼的研宄成果Ｉ除本文已经注明引用的内容外＜论文中不包含其他人己经发Ｓ或撰写过的研究成果，也不包含为获得至及其他教两机构的学位或证

3、书而使用过的材料一同工作的同志对。与我本研宄所傲的任钶贡献均已在论Ｚ中作了明麻的说明井表承谢Ｍ。：＆学位论文作者签：指导教师签名ｔＪｊ０期＋８：Ｓ期：在学期间研宄成果使用承诺书本学位论文作者完全Ｔ解学校有关保留、使用学位论文的规定．即：内Ｋ古大学有权旃学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、筘门送交学位论文的踅印袢和磁盘，允许编入有关数《泽进行检索，也可以采用髟印、绳印或其他ＳＷ手段保存、乳：编学位论文。为保护学薛筘导师的知识产权．作＃在学期间取得的研宄成果

4、Ｍ于内爱古大学，作者今后使用涉及在学期间主要研宂内容或研宄成杲，须征得内＊古大学栽读期间导师的同意，若用于发表论文，販权单位必须薯名为内Ｗ古欠学方可投雜或公开发表１学位论文作钱名：關綱輔；冬＿卜Ｊｇｒｂｂ期：糾内蒙古大学博士学位论文溶血磷脂酰胆碱的促动脉粥样硬化作用及其机制研究摘要由低密度脂蛋白（lowdensitylipoprotein,LDL）经氧化修饰形成的氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）是引起动脉粥样硬化的独立因子。ox-LDL主要通过促进血管平滑肌细胞（VSMCs

5、）的增殖和迁移，诱导血管内皮细胞（vascularendothelialcells,VECs）的凋亡，促进VECs的黏附因子表达使单核细胞黏附和聚集而形成泡沫细胞等过程促进动脉硬化进程，而目前对其详细的分子机理还很不清楚。所以，在本研究中将探索溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholine,LPC）作为ox-LDL的主要生理活性脂质参与ox-LDL的促进动脉硬化作用及其分子机理。研究中分别用人大动脉平滑肌细胞（HASMCs）和人脐静脉内皮细胞（HUVECs）做模型，研究LPC对平滑肌细胞

6、和内皮细胞的增殖、迁移以及细胞凋亡的影响而证明其促进动脉硬化作用，并在模型动物水平的实验中进一步寻找依据。分别用CCK-8试剂和NeuroProbeAA12趋化小室检测细胞增殖和迁移活性；用实时荧光定量PCR法检测受体及细胞内信号分子的表达；Westernblot和免疫组化用于检测蛋白磷酸化和蛋白因子；用siRNA干扰、抑制剂和拮抗剂用于确定相关基因的功能。研究发现，（1）LPC能促进HASMCs的增殖和迁移，而用拮抗剂阻断LPA1或siRNA干扰LPA1后能抑制LPC的作用。Gi蛋白的抑制剂百日咳毒素

7、I溶血磷脂酰胆碱的促动脉粥样硬化作用及其机制研究（pertussistoxin,PTX）也抑制了LPC诱导的HASMCs增殖和迁移。LPC可以促进ERK和p38的磷酸化，它们的抑制剂PD98059和SB203580抑制分别抑制了LPC诱导的细胞增殖和迁移。Rho相关激酶（ROCK）的抑制剂Y-27632也能抑制LPA诱导的HASMCs迁移。在HASMCs中ATX高表达，并在HASMCs的上清液中和动脉粥样模型动物血清中存在高活性的lyso-PLD。在模型动物血清中LPC含量提高，其血管组织中LPA1和A

8、TX的表达上调。（2）还发现LPC能诱导HUVECs的凋亡，而siRNA干扰LPC受体GPR4后这个作用被减弱。LPC能提高细胞Bax表达和降低Bcl-2的表达。然而，LPA能抑制HUVECs的凋亡。干扰LPA1的表达或PTX处理能抑制LPA诱导的HUVEC增殖，ERK的抑制剂（PD98059）和核受体PPAR的抑制剂（GW9662）也能抑制该过程。另外，EGF受体的抑制剂（AG1478）也抑制了LPA的作用。实时荧光定量PCR结果显示，L